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一、结核分枝杆菌Hsp16.3分子伴侣活性及其相关功能的研究 二、卡介苗菌MDP1基因敲除的研究 |
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论文目录 |
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目录 | 第1-8页 | 主要符号对照表 | 第8-10页 | 中文摘要 | 第10-12页 | 英文摘要 | 第12-15页 | 第一部分 结核分枝杆菌Hsp16.3分子伴侣活性及其相关功能的研究 | 第15-86页 | 前言 | 第15-18页 | 第一章 Hsp16.3蛋白的表达、纯化与多抗血清的制备 | 第18-30页 | 前言 | 第18页 | 第一节 实验材料 | 第18-22页 | 第二节 实验步骤 | 第22-25页 | 一、 Hsp16.3的表达 | 第22页 | 二、 Hsp16.3蛋白的纯化 | 第22-24页 | 三、 Hsp16.3蛋白浓度的测定 | 第24页 | 四、 Hsp16.3多抗血清的制备 | 第24-25页 | 第三节 结果与讨论 | 第25-30页 | 一、 Hsp16.3的表达与纯化 | 第25-27页 | 二、 蛋白质浓度的测定结果 | 第27-28页 | 三、 多克隆抗血清的制备结果 | 第28-30页 | 第二章 Hsp16.3突变体G59W的构建极其结构和功能研究 | 第30-52页 | 前言 | 第30-32页 | 第一节 实验材料 | 第32-33页 | 第二节 实验方法 | 第33-38页 | 一、 突变体质粒的构建以及突变体蛋白的纯化 | 第33-36页 | 1 引物设计 | 第33页 | 2 PCR扩增 | 第33-34页 | 3 PCR扩增产物的回收 | 第34页 | 4 PCR产物的平末端磷酸化 | 第34-35页 | 5 连接反应 | 第35页 | 6 转化与筛选 | 第35-36页 | 7 突变体蛋白质的纯化 | 第36页 | 8 突变体蛋白的浓度测定 | 第36页 | 二、 分子伴侣活性的检测 | 第36-37页 | 三、 园二色性光谱的测量 | 第37页 | 四、 ANS结合荧光光谱 | 第37页 | 五、 排阻层析色谱 | 第37-38页 | 六、 非变性孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第38页 | 七、 内源荧光光谱测量 | 第38页 | 第三节 实验结果 | 第38-49页 | 一、 G59W突变体质粒的构建以及突变体蛋白质的纯化 | 第38-40页 | 1 突变体质粒构建 | 第38-39页 | 2 突变体蛋白质纯化的结果 | 第39-40页 | 二、 分子伴侣活性检测结果 | 第40-41页 | 三、 CD光谱的测量结果 | 第41-44页 | 四、 ANS荧光光谱 | 第44页 | 五、 排阻层析色谱 | 第44-45页 | 六、 非变性孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第45-47页 | 七、 内源荧光检测结果 | 第47-49页 | 第四节 讨论 | 第49-52页 | 第三章 融合基因的克隆与表达 | 第52-63页 | 引言 | 第52页 | 第一节 实验材料 | 第52-53页 | 第二节 实验步骤 | 第53-58页 | 一、 引物设计 | 第53页 | 二、 融合基因的获得 | 第53-55页 | 1 PCR分别扩增Hsp16.3和38kDa基因 | 第54页 | 2 PCR产物琼脂糖凝胶电泳回收 | 第54页 | 3 PCR扩增Hsp16.3和38kDa的融合基因 | 第54-55页 | 三、 融合基因和质粒载体的酶切 | 第55-56页 | 四、 酶切产物的连接 | 第56页 | 五、 连接产物的转化 | 第56页 | 六、 重组子的鉴定 | 第56-57页 | 1 快速裂解及质粒大小的鉴定 | 第56页 | 2 PCR初步鉴定 | 第56-57页 | 3 酶切鉴定 | 第57页 | 4 测序鉴定 | 第57页 | 七、 融合蛋白的表达 | 第57-58页 | 第三节 结果 | 第58-60页 | 一、 融合蛋白的表达 | 第58-59页 | 二、 融合蛋白的可溶性 | 第59-60页 | 第四节 讨论 | 第60-63页 | 第四章 Hsp16.3蛋白细胞内抗氧化功能研究 | 第63-74页 | 引言 | 第63页 | 第一节 实验材料 | 第63页 | 第二节 实验方法 | 第63-68页 | 一、 Hsp16.3基因、38kDa基因的克隆 | 第63-68页 | 1 引物设计和合成 | 第64页 | 2 PCR扩增目的基因 | 第64-65页 | 3 目的基因与质粒载体的酶切 | 第65页 | 4 酶切产物的连接 | 第65-66页 | 5 连接产物的转化 | 第66页 | 6 重组子的筛选与鉴定 | 第66页 | 7 电转化 | 第66-67页 | 1 ). 耻垢分枝杆菌感受态细胞的制备 | 第66-67页 | 2 ). 电转化 | 第67页 | 8 Hsp16.3外源蛋白的表达与鉴定 | 第67-68页 | 二、 Hsp16.3抗氧化功能 | 第68页 | 第三节 结果与讨论 | 第68-74页 | 一、 Hsp16.3外源蛋白的表达与鉴定 | 第68-72页 | 1 重组质粒的酶切结果 | 第68-69页 | 2 15%SDS-PAGE凝胶检测结果 | 第69-70页 | 3 Western Blotting结果 | 第70-72页 | 二、 抗氧化结果 | 第72-74页 | 第五章 Hsp16.3蛋白细胞内底物的筛选 | 第74-80页 | 引言 | 第74-75页 | 第一节 实验材料 | 第75-76页 | 第二节 实验方法 | 第76-77页 | 第三节 结果与讨论 | 第77-80页 | 第六章 结论 | 第80-81页 | 第七章 参考文献 | 第81-86页 | 第二部分 卡介苗菌MDP1基因敲除技术的研究 | 第86-98页 | 前言 | 第87-88页 | 第一节 材料和方法 | 第88-90页 | 一、 材料 | 第88页 | 二、 方法 | 第88-90页 | 1 M.BCG基因组DNA的提取与纯化 | 第88页 | 2 引物设计及目的基因的PCR扩增 | 第88页 | 3 基因敲除质粒的构建及鉴定 | 第88-89页 | 4 M.BCG感受态细胞的制备及电转化 | 第89页 | 5 MDP1基因敲除菌株的筛选与鉴定 | 第89-90页 | 6 敲除菌株和原代菌株生长曲线的测定 | 第90页 | 第二节 结果 | 第90-94页 | 一、 目的基因MDP1的PCR扩增产物 | 第90-91页 | 二、 pKO-MDP1敲除质粒的酶切鉴定 | 第91-92页 | 三、 敲除菌株的筛选与鉴定 | 第92-93页 | 四、 敲除菌株和原代菌株生长曲线的测定 | 第93-94页 | 第三节 讨论 | 第94-96页 | 第四节 参考文献 | 第96-98页 | 第三部分 热休克蛋白的研究进展 | 第98-133页 | 引言 | 第99页 | 一、 热休克蛋白的分类 | 第99-100页 | 二、 热休克蛋白的转录调节 | 第100-102页 | 三、 热休克蛋白家族简介 | 第102-119页 | 1 Hsp100 | 第102-103页 | 2 Hsp90 | 第103-104页 | 3 Hsp70 | 第104-107页 | 4 Hsp60和Hsp10 | 第107-110页 | 5 小分子热休克蛋白 | 第110-119页 | 1 ). 小分子热休克蛋白的结果特点 | 第110-111页 | 2 ). 小分子热休克蛋白的生理作用 | 第111-113页 | (1) 保护细胞骨架 | 第111-112页 | (2) sHsp与细胞的生长和分化 | 第112页 | (3) sHsp与细胞凋亡 | 第112-113页 | 3 ). 小分子热休克蛋白的分子伴侣机制 | 第113-114页 | 4 ). 小分子热休克蛋白与疾病 | 第114-116页 | 5 ). 小分子热休克蛋白可以作为药物靶点 | 第116-117页 | 6 ). 小分子热休克蛋白的磷酸化 | 第117页 | 7 ). 小分子热休克蛋白举例 | 第117-119页 | (1) Alpha-crystallin | 第117-118页 | (2) Hsp16.3 | 第118-119页 | 四、 展望 | 第119-121页 | 五、 参考文献 | 第121-133页 | 致谢 | 第133页 |
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