| 独创性声明 | 第1页 |
| 论文使用授权的说明 | 第4-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述与研究背景 | 第16-39页 |
| 1 植物抗病机制研究进展 | 第16-27页 |
| ·植物与病原物相互作用的一般概念 | 第16页 |
| ·植物抗病基因的结构、功能及其作用机制 | 第16-21页 |
| ·NBS-LRR类蛋白 | 第17-18页 |
| ·胞外LRR蛋白(LRR-TM) | 第18页 |
| ·跨膜受体激酶类(LRR-TM-PK)蛋白 | 第18-19页 |
| ·胞内丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶(S／TK) | 第19页 |
| ·其它类型的R基因 | 第19-21页 |
| ·R基因与avr基因的识别 | 第21-23页 |
| ·植物R基因介导的信号传递 | 第23页 |
| ·植物抗病防卫反应的基本信号通路 | 第23-26页 |
| ·SA信号传导途径 | 第23-24页 |
| ·JA／ET信号传导途径 | 第24-25页 |
| ·信号途径之间的交流 | 第25-26页 |
| ·数量抗病性 | 第26-27页 |
| 2 核盘菌 | 第27-30页 |
| ·生物学特性 | 第27-28页 |
| ·致病机制 | 第28-29页 |
| ·抗病研究进展 | 第29-30页 |
| 3 拟南芥的功能基因组学研究 | 第30-31页 |
| 4 功能基因组学研究方法 | 第31-39页 |
| ·分析基因差异表达鉴定基因功能的研究方法 | 第31-33页 |
| ·反向遗传学鉴定基因功能的研究方法 | 第33-39页 |
| ·基因敲除(Gene disruption) | 第33页 |
| ·RNAi和基因沉默(Gene silencing) | 第33-35页 |
| ·利用嵌合RNA／DNA寡聚核苷酸(CO)产生特定基因突变 | 第35页 |
| ·基因陷阱(Gene trap) | 第35-36页 |
| ·T-DNA标签 | 第36-37页 |
| ·转座子标签 | 第37-39页 |
| 第二章 拟南芥——核盘菌病害系统分析 | 第39-56页 |
| 1 材料与方法 | 第39-46页 |
| ·拟南芥的种植 | 第39页 |
| ·菌核病菌的分离 | 第39页 |
| ·菌核的低温处理及子囊盘的诱导 | 第39页 |
| ·子囊孢子细胞形态观察 | 第39-40页 |
| ·菌核病菌的培养与接种 | 第40页 |
| ·发病过程观察 | 第40页 |
| ·组织染色观察 | 第40页 |
| ·扫描电镜观察 | 第40页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·杂交探针的制备 | 第41-42页 |
| ·总RNA的提取及鉴定 | 第42-43页 |
| ·异硫氰酸胍一步法提取总RNA | 第42-43页 |
| ·总RNA的鉴定 | 第43页 |
| ·Northern blot杂交 | 第43-44页 |
| ·RNA在膜上的转移及固定 | 第43-44页 |
| ·探针的标记 | 第44页 |
| ·预杂交和杂交 | 第44页 |
| ·洗膜及放射自显影 | 第44页 |
| ·RT-PCR | 第44-45页 |
| ·菌核病菌基因组DNA的提取 | 第45-46页 |
| ·菌核病菌18SrDNA的PCR扩增 | 第46页 |
| ·核酸序列数据的分析和系统树构建 | 第46页 |
| 2 结果分析 | 第46-54页 |
| ·菌核病菌在自然条件下的病组织上和PDA上均可形成黑色的菌核 | 第46-47页 |
| ·菌核的萌发及子囊盘的形成过程 | 第47-48页 |
| ·子囊及子囊孢子的细胞形态观察 | 第48-49页 |
| ·LSU rDNA的获得及系统分类地位的确定 | 第49-51页 |
| ·菌核病菌接种拟南芥后的症状发展过程 | 第51-53页 |
| ·总RNA的鉴定 | 第53页 |
| ·PR1和PDF1.2的表达变化 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| ·菌核病病原的确定 | 第54-55页 |
| ·拟南芥-核盘菌病害研究系统的确定 | 第55-56页 |
| 第三章 核盘菌诱导拟南芥特异表达基因的获得与分析 | 第56-79页 |
| 1 材料与方法 | 第56-67页 |
| ·拟南芥的种植 | 第56页 |
| ·核盘菌的培养与接种 | 第56页 |
| ·总RNA的提取及鉴定 | 第56页 |
| ·mRNA的分离纯化与浓缩 | 第56-57页 |
| ·抑制消减杂交(SSH) | 第57-62页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第57-58页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第58页 |
| ·双链cDNA的Rsa Ⅰ酶切 | 第58-59页 |
| ·cDNA两端接头的连接 | 第59-60页 |
| ·第一次杂交反应 | 第60页 |
| ·第二次杂交 | 第60-61页 |
| ·PCR扩增反应 | 第61-62页 |
| ·抑制差减cDNA文库的构建 | 第62-64页 |
| ·PCR产物的连接 | 第62页 |
| ·连接产物的转化 | 第62-64页 |
| ·CaCl_2法转化 | 第62-63页 |
| ·电击法转化 | 第63-64页 |
| ·转化重组子的鉴定 | 第64页 |
| ·消减文库质量鉴定 | 第64页 |
| ·菌落杂交筛选差异表达克隆 | 第64-65页 |
| ·杂交膜的制备 | 第64-65页 |
| ·杂交探针的准备 | 第65页 |
| ·菌落杂交 | 第65页 |
| ·Reverse Northern blot | 第65-67页 |
| ·PCR产物凝胶电泳 | 第65页 |
| ·膜的吸印及DNA固定 | 第65-66页 |
| ·探针的标记和杂交 | 第66-67页 |
| ·洗膜及放射自显影 | 第67页 |
| ·差异表达基因序列的测定及其功能分析 | 第67页 |
| ·RT-PCR | 第67页 |
| ·T-DNA插入失活突变体抗性评价 | 第67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-75页 |
| ·mRNA的分离纯化及浓缩 | 第67-68页 |
| ·抑制消减杂交的效果分析 | 第68-69页 |
| ·cDNA消减文库质量鉴定 | 第69页 |
| ·菌落杂交筛选差异表达克隆 | 第69-70页 |
| ·反向Northern blot杂交进一步筛选差异表达基因 | 第70-71页 |
| ·差异表达基因序列的测定及其功能分析 | 第71-74页 |
| ·RT-PCR分析差异表达基因 | 第74-75页 |
| ·T-DNA插入失活突变体对核盘菌的敏感性鉴定 | 第75页 |
| 3 论论 | 第75-79页 |
| ·抑制消减杂交方法的应用 | 第75-76页 |
| ·核盘菌侵染诱导的拟南芥cDNA文库 | 第76-79页 |
| 第四章 拟南芥抗菌核病激活标签突变体库的构建获得及遗传分析 | 第79-93页 |
| 1 材料与方法 | 第79-84页 |
| ·拟南芥的种植 | 第79-80页 |
| ·浸花法转化拟南芥 | 第80页 |
| ·BASTA筛选转化植株 | 第80页 |
| ·突变体中T-DNA插入拷贝数分析 | 第80页 |
| ·PCR扩增检测拟南芥转化株 | 第80-81页 |
| ·农杆菌继代培养过程中增强子存在情况的观察分析 | 第81页 |
| ·核盘菌的培养与接种 | 第81页 |
| ·抗病性的验证 | 第81页 |
| ·T-DNA侧翼序列的获得与分析 | 第81-83页 |
| ·RNA的提取 | 第83-84页 |
| ·RT-PCR | 第84页 |
| ·T-DNA插入失活突变体抗性评价 | 第84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-90页 |
| ·拟南芥转化条件的优化分析 | 第84-85页 |
| ·拟南芥突变体库的分析 | 第85-86页 |
| ·菌核病抗性增强的激活标签突变体筛选 | 第86-87页 |
| ·菌核病抗性增强突变体的分子遗传分析 | 第87-90页 |
| 3 讨论 | 第90-93页 |
| ·关于拟南芥转化条件的优化 | 第90-91页 |
| ·关于增强子的丢失 | 第91页 |
| ·关于增强子对附近基因的影响 | 第91-92页 |
| ·用激活标签突变体筛选数量性状控制的抗性材料是切实可行的 | 第92-93页 |
| 第五章 At3g62690、At3g62670、At4g16260、At5g16050、At1g30280基因的克隆及亚细胞定位 | 第93-104页 |
| 1 材料与方法 | 第93-97页 |
| ·拟南芥的种植 | 第93页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取 | 第93页 |
| ·At3g62690、At3g62670、At4g16260、At5g16050、At1g30280基因的克隆 | 第93-94页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第94页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第94页 |
| ·Gateway反应步骤 | 第94-95页 |
| ·BP反应 | 第94-95页 |
| ·LR反应 | 第95页 |
| ·转化农杆菌 | 第95-96页 |
| ·拟南芥的转化及突变体的筛选 | 第96页 |
| ·利用洋葱表皮瞬时表达系统表达侯选基因GFP融合蛋白 | 第96-97页 |
| ·洋葱表皮细胞的准备 | 第96页 |
| ·质粒DNA的纯化和金粉包埋 | 第96页 |
| ·用基因枪法在洋葱表皮细胞中导入外源质粒 | 第96-97页 |
| ·侯选基因GFP融合蛋白亚细胞定位的显微镜观察 | 第97页 |
| 2 结果与分析 | 第97-102页 |
| ·At3g62690、At3g62670、At4g16260、At5g16050、At1g30280基因的克隆 | 第97-98页 |
| ·转化子的筛选 | 第98-99页 |
| ·At1g30280蛋白的结构预测及亚细胞定位 | 第99-100页 |
| ·At5g16050蛋白的结构预测及亚细胞定位 | 第100-102页 |
| 3 讨论 | 第102-104页 |
| ·Gateway克隆技术适用于大规模基因的克隆 | 第102-103页 |
| ·At1g30280和At5g16050的亚细胞定位分析 | 第103-104页 |
| 小结 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-120页 |
| 附录 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
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