| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-34页 |
| ·戊型肝炎病毒的研究进展 | 第14-23页 |
| ·戊型肝炎病毒的研究概况 | 第14页 |
| ·分子病原学 | 第14-15页 |
| ·分子生物学 | 第15-23页 |
| ·基因组结构 | 第15页 |
| ·戊型肝炎病毒的编码蛋白 | 第15-17页 |
| ·戊型肝炎病毒基因分型的多样性 | 第17-18页 |
| ·基因分型与地理分布的关系 | 第18-19页 |
| ·戊型肝炎病毒的传播途径 | 第19页 |
| ·戊型肝炎病毒的宿主 | 第19页 |
| ·动物中HEV的感染流行 | 第19-21页 |
| ·戊型肝炎病毒的致病性和临床表现 | 第21页 |
| ·戊型肝炎病毒的检测方法 | 第21-22页 |
| ·戊型肝炎病毒疫苗的研制 | 第22-23页 |
| ·HEV 的体外细胞培养 | 第23页 |
| ·禽戊型肝炎病毒的研究进展 | 第23-31页 |
| ·禽戊型肝炎病毒研究概况 | 第23-24页 |
| ·禽戊型肝炎病毒的病原特性与基因组结构 | 第24-25页 |
| ·禽戊型肝炎病毒流行病学的研究概况 | 第25-26页 |
| ·禽戊型肝炎病毒的传播 | 第26页 |
| ·禽戊型肝炎病毒的致病性 | 第26-27页 |
| ·禽戊型肝炎病毒鸡体内的复制位点 | 第27页 |
| ·禽戊型肝炎病毒免疫学研究状况 | 第27-31页 |
| ·禽 HEV ORF2 抗原表位的鉴定 | 第27-30页 |
| ·禽 HEV 基因重组 ORF2 诱导的保护性免疫反应 | 第30-31页 |
| ·禽戊型肝炎病毒的人畜共患性 | 第31页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第31-34页 |
| 2 禽 HEV 衣壳蛋白抗原性分析 | 第34-66页 |
| ·材料和方法 | 第34-54页 |
| ·材料 | 第34-39页 |
| ·病料 | 第34页 |
| ·菌株和质粒 | 第34页 |
| ·载体 | 第34-36页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·主要试剂的配制 | 第37-39页 |
| ·方法 | 第39-54页 |
| ·病料的处理 | 第39页 |
| ·RNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·分段蛋白的设计 | 第40-43页 |
| ·目的片段的扩增 | 第43-44页 |
| ·氯化钙法制备新鲜的 E.coli 感受态细胞 | 第44页 |
| ·PCR 产物的回收及连接 | 第44-45页 |
| ·连接产物转化 | 第45页 |
| ·重组质粒的提取 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第46页 |
| ·诱导表达条件的筛选及优化 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白质电泳分析 | 第48-49页 |
| ·avian HEV ORF2-A/ORF2-B 蛋白的 Western blot 鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第50页 |
| ·蛋白纯化 | 第50-51页 |
| ·禽 HEV ORF2s（ORF2-C to F）蛋白的 Western blot 鉴定 | 第51-52页 |
| ·小鼠免疫 | 第52页 |
| ·免疫小鼠抗体效价的测定 | 第52-53页 |
| ·间接 ELISA 条件的优化 | 第53-54页 |
| ·间接 ELISA 方法的初步应用 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-63页 |
| ·禽 HEV 分段基因序列的 PCR 扩增结果 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白表达和鉴定结果 | 第55-57页 |
| ·重组蛋白表达结果 | 第55-56页 |
| ·重组蛋白鉴定结果 | 第56-57页 |
| ·免疫小鼠血清抗体的 ELISA 检测 | 第57页 |
| ·ORF2-A 和 ORF2-B 蛋白为包被抗原的间接 ELISA 方法的建立 | 第57-60页 |
| ·抗原包被浓度与血清最佳稀释度的确定 | 第57-58页 |
| ·抗原包被液的确定 | 第58页 |
| ·包被条件的确定 | 第58-59页 |
| ·封闭液选择的确定 | 第59页 |
| ·血清最佳作用时间的确定 | 第59-60页 |
| ·底物最佳反应时间的确定 | 第60页 |
| ·间接 ELISA 的特异性和重复性试验 | 第60页 |
| ·ELISA 方法 Cut-off 值的确定 | 第60-61页 |
| ·临床收集鸡血清检测 | 第61-62页 |
| ·间接 ELISA 方法检测 | 第61-62页 |
| ·Western blot 方法检测 | 第62页 |
| ·ORF2-A 主要抗原表位区分析 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| 3 猪 HEV 衣壳蛋白 C-端区域单克隆抗体的制备及鉴定 | 第66-82页 |
| ·材料与方法 | 第66-75页 |
| ·材料 | 第66-68页 |
| ·病料 | 第66页 |
| ·菌株和质粒 | 第66页 |
| ·载体 | 第66页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第66-67页 |
| ·实验动物及病毒株 | 第67页 |
| ·主要仪器 | 第67页 |
| ·溶液的配制 | 第67-68页 |
| ·方法 | 第68-75页 |
| ·猪 HEV ORF2 C-端 268 个氨基酸基因的扩增及表达 | 第68-69页 |
| ·猪 HEV ORF2-S 蛋白鉴定及表达纯化 | 第69页 |
| ·小鼠免疫和免疫小鼠效价的测定 | 第69页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第69-72页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第72-74页 |
| ·临床猪血清 HEV 抗体检测 | 第74-75页 |
| ·结果 | 第75-80页 |
| ·猪 HEV ORF2-S 基因序列的 PCR 扩增结果 | 第75页 |
| ·重组蛋白表达和鉴定结果 | 第75-76页 |
| ·免疫小鼠血清抗体效价检测 | 第76页 |
| ·抗猪 HEV ORF2-S 蛋白特异性单克隆抗体细胞的筛选 | 第76-77页 |
| ·单抗腹水的制备与纯化 | 第77页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第77-79页 |
| ·单抗的特异性鉴定 | 第77-78页 |
| ·单抗亚型的鉴定 | 第78-79页 |
| ·抗 HEV 单抗识别抗原表位的鉴定 | 第79页 |
| ·猪临床血清检测结果 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| 4 禽和猪 HEV 衣壳蛋白共有抗原表位分析 | 第82-88页 |
| ·材料与方法 | 第82-84页 |
| ·材料 | 第82-83页 |
| ·单抗和蛋白 | 第82页 |
| ·主要试剂 | 第82页 |
| ·主要仪器 | 第82-83页 |
| ·方法 | 第83-84页 |
| ·利用 ELISA 方法分析共有表位 | 第83页 |
| ·Western blot 方法分析禽猪 HEV ORF2 C-端共有表位 | 第83-84页 |
| ·结果 | 第84-86页 |
| ·禽 HEV ORF2-1 单抗与猪 HEV ORF2-S 蛋白反应 | 第84-85页 |
| ·ELISA 检测结果 | 第84页 |
| ·Western blot 检测结果 | 第84-85页 |
| ·猪 HEV ORF2-S 单抗与禽 HEV ORF2-1 蛋白的反应 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| 5 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第100页 |
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