| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 绪论 | 第9-19页 |
| ·降异戊二烯类化合物的合成 | 第9-12页 |
| ·降异戊二烯类化合物的化学合成 | 第10页 |
| ·降异戊二烯类化合物的生物合成 | 第10-12页 |
| ·葡萄中常见降异戊二烯类化合物 | 第12-14页 |
| ·类胡萝卜素裂解双加氧酶的研究进展 | 第14-16页 |
| ·类胡萝卜素裂解双加氧酶的功能 | 第14-15页 |
| ·胡萝卜素裂解双加氧酶生物体内的定位 | 第15页 |
| ·类胡萝卜素裂解双加氧酶的合成方式 | 第15页 |
| ·生物和非生物胁迫对降异戊二烯类化合物合成和积累的影响 | 第15-16页 |
| ·葡萄体内降异戊二烯类化合物生物合成的研究进展 | 第16页 |
| ·酵母作为表达载体的研究进展 | 第16-17页 |
| ·研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| ·技术路线 | 第18-19页 |
| 2 葡萄果实中VvCCDs基因的克隆与序列分析 | 第19-34页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·植物材料 | 第19-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·酶及生化试剂 | 第20页 |
| ·实验仪器 | 第20页 |
| ·溶液及培养基的配置 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-25页 |
| ·葡萄果实总RNA的提取 | 第20-21页 |
| ·葡萄果实总RNA的纯化 | 第21页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测所提取RNA的质量 | 第21-22页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第22页 |
| ·VvCCDs基因的电子克隆及引物设计 | 第22-23页 |
| ·VvCCDs全长基因的克隆和扩增 | 第23-24页 |
| ·目的片段的凝胶回收纯化 | 第24页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第24-25页 |
| ·pMD@19-T-VvCCDs克隆载体的转化 | 第25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25页 |
| ·结果与讨论 | 第25-33页 |
| ·总RNA的提取及纯化 | 第25-26页 |
| ·VvCCDs全长基因的扩增 | 第26页 |
| ·VvCCDs全长基因的序列分析 | 第26-27页 |
| ·VvCCDs染色体定位及内含子分析 | 第27-29页 |
| ·VvCCDs同源性比较及系统进化分析 | 第29-30页 |
| ·五个品种葡萄果实中VvCCD1单核苷酸多态性分析 | 第30-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 3 降异戊二烯类化合物含量与VvCCDs表达及单核苷酸多态性的关系 | 第34-55页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·植物材料 | 第34-35页 |
| ·酶及生化试剂 | 第35页 |
| ·实验仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·五个品种中降异戊二烯类化合物含量分析 | 第35页 |
| ·葡萄果实总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·葡萄果实总RNA的纯化 | 第36页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测所提取RNA的质量 | 第36页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第36页 |
| ·Real Time PCR特异性引物的设计 | 第36页 |
| ·Real Time PCR特异性引物的筛选 | 第36-37页 |
| ·Real Time PCR检测分析 | 第37页 |
| ·基因表达相对定量分析计算 | 第37页 |
| ·实验结果与讨论 | 第37-54页 |
| ·五个不同葡萄品种中降异戊二烯类化合物的检测 | 第37-44页 |
| ·Real-time PCR引物的筛选 | 第44-47页 |
| ·VvCCDs在‘赤霞珠’不同组织和葡萄果实发育期中的表达 | 第47-48页 |
| ·不同年份VvCCDs在‘赤霞珠’果实发育过程中的表达 | 第48-49页 |
| ·VvCCDs在五个不同品种葡萄果实中的表达 | 第49-51页 |
| ·VvCCDs在五个不同品种葡萄果实中的表达与产物积累之间的关系 | 第51-52页 |
| ·五个不同品种葡萄果实中VvCCD1s多核苷酸多态性与产物积累之间的关系 | 第52-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 4 VvCCDs原核表达菌株的构建 | 第55-65页 |
| ·实验材料 | 第55-56页 |
| ·菌株与质粒 | 第55页 |
| ·酶及生化试剂 | 第55页 |
| ·实验仪器 | 第55页 |
| ·溶液配制 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-60页 |
| ·pET48b-VvCCDs原核表达载体的构建 | 第56-59页 |
| ·VvCCDs蛋白在大肠杆菌DH5α体内小量诱导表达 | 第59页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳 | 第59-60页 |
| ·VvCCDs蛋白在大肠杆菌DH5α体内大量诱导表达 | 第60页 |
| ·大肠杆菌表达载体的裂解及包含体的检测 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-64页 |
| ·VvCCDs表达载体的构建 | 第60-62页 |
| ·小量诱导表达蛋白 | 第62-63页 |
| ·VvCCDs蛋白表达过程中包含体的产生 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 5 VvCCDs酵母表达菌株的构建及酶促产物检测 | 第65-81页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·菌株与质粒 | 第65页 |
| ·酶及生化试剂 | 第65页 |
| ·实验仪器 | 第65页 |
| ·溶液及培养基的配置 | 第65-66页 |
| ·实验方法 | 第66-73页 |
| ·PGAD T7载体多克隆位点(Nultip Cloning Site,MCS)改造 | 第66-67页 |
| ·pGAD T7载体上核定位信号(NLS)的去除 | 第67-68页 |
| ·酵母表达载体ZWD的构建 | 第68-69页 |
| ·ZWD-VvCCDs表达载体的构建及鉴定 | 第69-70页 |
| ·VvCCDs酵母表达菌株的构建 | 第70-71页 |
| ·重构菌株的质粒提取 | 第71页 |
| ·重构菌株的鉴定 | 第71-72页 |
| ·VvCCDs酵母表达菌株的香气物质检测 | 第72-73页 |
| ·香气物质定性分析 | 第73页 |
| ·结果与分析 | 第73-80页 |
| ·附加型酵母表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·附加型酵母表达载体图谱分析 | 第74-75页 |
| ·ZWD-VvCCDs表达载体的构建 | 第75-76页 |
| ·ZWD-VvCCDs表达酵母菌株的构建 | 第76页 |
| ·ZWD-VvCCDs表达酵母菌株生长曲线的绘制 | 第76-77页 |
| ·VvCCDs酵母表达菌株的香气物质检测 | 第77-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 结论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
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