| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| 1.1 生物催化概述 | 第13-17页 |
| 1.1.1 生物催化的优点 | 第13页 |
| 1.1.2 生物催化方式 | 第13-14页 |
| 1.1.3 不对称还原羰基还原酶 | 第14页 |
| 1.1.4 酶不对称还原合成手性醇的反应机理 | 第14-15页 |
| 1.1.5 氧化还原酶应用于手性醇合成 | 第15-16页 |
| 1.1.6 阿托伐他汀钙药物中间体的合成 | 第16-17页 |
| 1.2 大肠杆菌表达系统和培养优化 | 第17-24页 |
| 1.2.1 质粒表达载体 | 第18-19页 |
| 1.2.2 表达宿主菌 | 第19页 |
| 1.2.3 影响大肠杆菌培养的环境因素 | 第19-22页 |
| 1.2.4 发酵过程建模 | 第22-24页 |
| 1.3 氧化还原酶催化不对称氧化还原反应动力学研究 | 第24-29页 |
| 1.3.1 单底物反应动力学 | 第24-26页 |
| 1.3.2 多底物反应动力学 | 第26-27页 |
| 1.3.3 酶抑制动力学 | 第27-29页 |
| 1.4 本课题研究意义和研究内容 | 第29-30页 |
| 1.4.1 本课题的研究意义 | 第29页 |
| 1.4.2 本论文的研究思路及主要研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 羰基还原酶的表达优化 | 第30-45页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第30-32页 |
| 2.2.1 菌种 | 第30页 |
| 2.2.2 培养基及抗生素 | 第30-31页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第31页 |
| 2.2.4 主要仪器与设备 | 第31页 |
| 2.2.5 培养条件 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-34页 |
| 2.3.1 细胞生长测定 | 第32页 |
| 2.3.2 粗酶液的提取 | 第32页 |
| 2.3.3 NADPH浓度测定 | 第32-33页 |
| 2.3.4 蛋白浓度的测定 | 第33页 |
| 2.3.5 羰基还原酶酶活检测方法 | 第33-34页 |
| 2.3.6 菌种的保藏 | 第34页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第34-43页 |
| 2.4.1 产羰基还原酶重组菌的筛选 | 第34-35页 |
| 2 .4.2重组菌产酶培养基的优化 | 第35-37页 |
| 2.4.3 微量元素浓度的优化 | 第37页 |
| 2.4.4 摇瓶接种量的优化 | 第37-38页 |
| 2.4.5 摇瓶装液量的优化 | 第38-39页 |
| 2.4.6 加入诱导剂时间的优化 | 第39-41页 |
| 2.4.7 诱导剂浓度的优化 | 第41页 |
| 2.4.8 诱导后表达时间的优化 | 第41-42页 |
| 2.4.9 诱导温度的优化 | 第42-43页 |
| 2.5 结论 | 第43-45页 |
| 第三章 重组大肠杆菌的扩大培养和发酵动力学 | 第45-63页 |
| 3.1 前言 | 第45页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第45-47页 |
| 3.2.1 主要实验试剂 | 第45-46页 |
| 3.2.2 主要化学仪器 | 第46页 |
| 3.2.3 菌种 | 第46页 |
| 3.2.4 培养基 | 第46页 |
| 3.2.5 培养条件 | 第46-47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.3.1 发酵过程参数的测定 | 第47-48页 |
| 3.3.2 数据的获取及处理 | 第48页 |
| 3.3.3 细胞破碎方式 | 第48-49页 |
| 3.3.4 酶干粉的制备 | 第49页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第49-61页 |
| 3.4.1 大肠杆菌分批发酵生长代谢变化 | 第49-50页 |
| 3.4.2 菌体生长动力学模型 | 第50-52页 |
| 3.4.3 产物合成动力学模型 | 第52-54页 |
| 3.4.4 葡萄糖消耗动力学模型 | 第54-55页 |
| 3.4.5 pH-stat分批补料发酵 | 第55-56页 |
| 3.4.6 破胞方式的选择 | 第56-61页 |
| 3.4.7 酶干粉的制备 | 第61页 |
| 3.5 结论 | 第61-63页 |
| 第四章 羰基还原酶的酶学性质研究 | 第63-82页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第63-64页 |
| 4.2.1 主要实验试剂 | 第63-64页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第64页 |
| 4.3 实验方法 | 第64-68页 |
| 4.3.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第64-65页 |
| 4.3.2 酶蛋白的纯化 | 第65页 |
| 4.3.3 辅助底物及辅酶再生 | 第65页 |
| 4.3.4 酶促反应速度的计算 | 第65页 |
| 4.3.5 羰基还原酶性质的研究 | 第65-68页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第68-79页 |
| 4.4.1 Ni-NTA纯化及SDS-PAGE分析 | 第68-69页 |
| 4.4.2 羰基还原酶辅酶依赖型的确定 | 第69页 |
| 4.4.3 羰基还原酶的最适反应温度和温度稳定性 | 第69-71页 |
| 4.4.4 酶的最适反应pH和pH稳定性 | 第71-72页 |
| 4.4.5 金属离子对酶活的影响 | 第72页 |
| 4.4.6 有机溶剂对酶活的影响 | 第72-73页 |
| 4.4.7 羰基还原酶酶促反应动力学研究 | 第73-77页 |
| 4.4.8 羰基还原酶双底物酶促反应速度方程及动力学常数求解 | 第77-79页 |
| 4.5 羰基还原酶纯酶对ATS-6的转化 | 第79-80页 |
| 4.5.1 羰基还原酶纯酶对ATS-6转化产物的检测 | 第79页 |
| 4.5.2 羰基还原酶纯酶对ATS-6转化进程测定 | 第79-80页 |
| 4.6 结论 | 第80-82页 |
| 第五章 结论与展望 | 第82-84页 |
| 5.1 结论 | 第82-83页 |
| 5.2 展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
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