致谢 | 第7-11页 |
摘要 | 第11-14页 |
1 生防真菌胞壁完整性与抗逆性状关联的研究现状 | 第14-26页 |
1.1 生防真菌的抗逆生物学 | 第14-16页 |
1.2 真菌细胞壁的结构与功能 | 第16-19页 |
1.2.1 葡聚糖 | 第17-18页 |
1.2.2 几丁质 | 第18页 |
1.2.3 胞壁蛋白质 | 第18-19页 |
1.3 真菌细胞壁完整性信号通路 | 第19-24页 |
1.3.1 CWI信号通路的膜传感器 | 第20-21页 |
1.3.2 组成CWI信号通路的MAPK蛋白激酶 | 第21-22页 |
1.3.3 CWI信号通路的激活 | 第22-24页 |
1.4 展望 | 第24-26页 |
2 球孢白僵菌细胞壁完整性信号通路级联激酶的功能解析 | 第26-54页 |
2.1 材料 | 第27-28页 |
2.1.1 菌株及培养条件 | 第27页 |
2.1.2 试剂及试剂盒 | 第27-28页 |
2.2 方法 | 第28-38页 |
2.2.1 DNA 提取 | 第28页 |
2.2.2 RNA提取及反转录 | 第28-29页 |
2.2.3 Bck1、Mkk1和Slt2的基因克隆与蛋白序列分析 | 第29页 |
2.2.4 Bck1、Mkk1和Slt2单基因敲除/回补载体的构建及转化 | 第29-31页 |
2.2.5 基因敲除和回补转化子的筛选与鉴定 | 第31-32页 |
2.2.6 菌落生长、产孢量及分生孢子活力检测 | 第32-33页 |
2.2.7 不同类型的胁迫反应测定 | 第33-34页 |
2.2.8 生物测定 | 第34页 |
2.2.9 表型相关基因的转录水平测定 | 第34页 |
2.2.10 各敲除株胞壁受损程度的检测 | 第34-36页 |
2.2.11 胞内甘露醇和海藻糖含量的检测 | 第36-37页 |
2.2.12 各敲除株Hog1磷酸化水平的测定 | 第37页 |
2.2.13 数据统计与分析 | 第37-38页 |
2.3 结果与分析 | 第38-50页 |
2.3.1 Bck1、Mkk1和Slt2的基因及其蛋白序列特征 | 第38页 |
2.3.2 球孢白僵菌Bck1、Mkk1和Slt2的缺失及回补菌株鉴定 | 第38-40页 |
2.3.3 Bck1、Mkk1和Slt2对生长、产孢及孢子活力的调控作用 | 第40-43页 |
2.3.4 球孢白僵菌Bck1、Mkk1和Slt2调控细胞壁完整性 | 第43-45页 |
2.3.5 球孢白僵菌Bck1、Mkk1和Slt2参与调控高渗反应 | 第45-47页 |
2.3.6 Bck1、Mkk1和Slt2参与球孢白僵菌生防潜能的调控 | 第47-49页 |
2.3.7 Bck1、Mkk1和Slt2参与调控球孢白僵菌胞内甘露醇和海藻糖的代谢 | 第49-50页 |
2.4 讨论 | 第50-54页 |
3 两种昆虫病原真菌中GPI锚定蛋白Ecm33的功能比较 | 第54-70页 |
3.1 材料 | 第55页 |
3.1.1 菌株及培养条件 | 第55页 |
3.1.2 试剂及试剂盒 | 第55页 |
3.2 方法 | 第55-60页 |
3.2.1 Bbecm33和Mrecm33的克隆与序列分析 | 第55-56页 |
3.2.2 Bbecm33和Mrecm33的转录动态分析 | 第56页 |
3.2.3 Bbecm33和Mrecm33的亚细胞定位 | 第56-57页 |
3.2.4 Bbecm33和Mrecm33的敲除/回补株构建 | 第57-58页 |
3.2.5 菌落生长及产孢量测定 | 第58页 |
3.2.6 分生孢子表面糖分子抗原表位变化的测定 | 第58-59页 |
3.2.7 分生孢子内甘露醇和海藻糖含量的测定 | 第59页 |
3.2.8 各菌株对化学胁迫敏感性的测定 | 第59页 |
3.2.9 各菌株生防潜能的测定 | 第59-60页 |
3.2.10 数据分析 | 第60页 |
3.3 结果与分析 | 第60-66页 |
3.3.1 球孢白僵菌和罗伯茨绿僵菌Ecm33同源蛋白的序列特征 | 第60页 |
3.3.2 野生株中Bbecm33和Mrecm33的转录特征 | 第60-62页 |
3.3.3 Bbecm33和Mrecm33的亚细胞定位 | 第62-63页 |
3.3.4 Bbecm33和Mrecm33的缺失对生长和产孢的影响 | 第63-64页 |
3.3.5 Bbecm33和Mrecm33影响分生孢子表面组分和孢内物质积累 | 第64页 |
3.3.6 Bbecm33和Mrecm33对抗逆性状及毒力的影响 | 第64-66页 |
3.4 讨论 | 第66-70页 |
4 两种昆虫病原真菌中胞壁合成蛋白磷酸酶Ssd1的功能比较 | 第70-84页 |
4.1 材料 | 第70-71页 |
4.1.1 菌株及培养条件 | 第70页 |
4.1.2 试剂及试剂盒 | 第70-71页 |
4.2 方法 | 第71-73页 |
4.2.1 Bbssd1和Mrssd1基因的克隆与序列分析 | 第71页 |
4.2.2 Bbssd1和Mrssd1的胶体金免疫定位 | 第71页 |
4.2.3 Bbssd1和Mrssd1的转录动态分析 | 第71页 |
4.2.4 Bbssd1和Mrssd1的敲除/回补株构建 | 第71-73页 |
4.2.5 表型分析 | 第73页 |
4.2.6 胞壁合成相关基因的转录水平分析 | 第73页 |
4.2.7 数据统计与分析 | 第73页 |
4.3 结果与分析 | 第73-80页 |
4.3.1 Bbssd1和Mrssd1的序列结构、基因转录表达和亚细胞定位 | 第73-76页 |
4.3.2 Bbssd1和Mrssd1的缺失影响生长、产孢及孢子活力 | 第76-78页 |
4.3.3 Bbssd1和Mrssd1的缺失影响抗逆性状和毒力 | 第78-79页 |
4.3.4 Bbssd1和Mrssd1的缺失影响分生孢子壁结构和孢内小分子溶质累积 | 第79-80页 |
4.4 讨论 | 第80-84页 |
5 球孢白僵菌13种含WSC结构域蛋白的功能比较 | 第84-104页 |
5.1 材料 | 第85页 |
5.1.1 菌株和试剂 | 第85页 |
5.2 方法 | 第85-90页 |
5.2.1 球孢白僵菌WSC蛋白的序列分析 | 第85-86页 |
5.2.2 wsc1~13基因的转录动态分析 | 第86页 |
5.2.3 wsc1~13的敲除/回补株构建 | 第86-89页 |
5.2.4 表型分析 | 第89页 |
5.2.5 表型相关基因的转录水平分析 | 第89-90页 |
5.3 结果与分析 | 第90-99页 |
5.3.1 球孢白僵菌WSC蛋白序列特征及其基因的转录特征 | 第90-93页 |
5.3.2 球孢白僵菌WSC结构蛋白的生物学功能 | 第93-97页 |
5.3.3 表型相关基因的转录水平变化 | 第97-99页 |
5.4 讨论 | 第99-104页 |
6 结语 | 第104-106页 |
参考文献 | 第106-118页 |
Summary | 第118-120页 |
附录:攻读博士学位期间的主要成果 | 第121页 |