| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第7-11页 |
| 第1章 综述 | 第11-20页 |
| 1.1 DNA聚合酶 | 第11-17页 |
| 1.1.1 DNA聚合酶的发现 | 第11页 |
| 1.1.2 DNA聚合酶的分类及功能 | 第11-14页 |
| 1.1.3 DNA聚合酶的应用 | 第14-16页 |
| 1.1.4 DNA聚合酶的结构特点 | 第16-17页 |
| 1.2 热启动PCR | 第17-18页 |
| 1.3 主要研究目的及意义 | 第18-20页 |
| 第2章 耐热DNA聚合酶基因的改造 | 第20-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第20页 |
| 2.1.2 实验所用试剂及培养基 | 第20页 |
| 2.1.3 实验所用菌株与质粒 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-24页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2.2 基因突变 | 第21-24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-27页 |
| 2.3.1 重组质粒pET22b-polAD146AE148A的构建 | 第24-25页 |
| 2.3.2 重组质粒pET22b-polAD146AE148AA490L的构建 | 第25-26页 |
| 2.3.3 重组质粒pET22b-polAD146AE148A413LYP415SAVA490L的构建 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-29页 |
| 2.5 小结 | 第29-31页 |
| 第3章 重组DNA聚合酶在大肠杆菌中的高效表达与纯化 | 第31-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第31页 |
| 3.1.2 实验所用试剂及培养基配方 | 第31页 |
| 3.1.3 实验所用菌株及质粒 | 第31-32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 3.2.1 DNA聚合酶诱导表达条件的优化 | 第32页 |
| 3.2.2 镍柱纯化重组DNA聚合酶 | 第32-33页 |
| 3.2.3 重组DNA聚合酶PCR反应缓冲液的优化及热稳定性实验 | 第33-35页 |
| 3.2.4 重组DNA聚合酶酶活力检测及酶活单位标定 | 第35-36页 |
| 3.2.5 荧光染料Cy3掺入实验 | 第36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-44页 |
| 3.3.1 DNA聚合酶诱导表达条件的优化 | 第36-39页 |
| 3.3.2 DNA聚合酶的纯化 | 第39-40页 |
| 3.3.3 重组DNA聚合酶PCR反应缓冲液的优化及热稳定性实验 | 第40-42页 |
| 3.3.4 重组DNA聚合酶酶活力检测及酶活单位标定 | 第42-44页 |
| 3.3.5 荧光染料Cy3掺入实验 | 第44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-45页 |
| 3.5 小结 | 第45-47页 |
| 第4章 DNA聚合酶纳米抗体的淘选与鉴定 | 第47-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第47页 |
| 4.1.2 实验所用试剂及培养基配方 | 第47-48页 |
| 4.1.3 实验所用菌株 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 4.2.1 DNA聚合酶纳米抗体的淘选 | 第48-51页 |
| 4.2.2 DNA聚合酶纳米抗体鉴定 | 第51-52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-57页 |
| 4.3.1 针对Taq DNA聚合酶的亲和淘选与鉴定 | 第52-54页 |
| 4.3.2 针对自制DNA聚合酶的亲和淘选与鉴定 | 第54-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-58页 |
| 4.5 小结 | 第58-59页 |
| 第5章 DNA聚合酶纳米抗体的表达及活性鉴定 | 第59-70页 |
| 5.1 实验材料 | 第60页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第60页 |
| 5.1.2 实验所用试剂及培养基配方 | 第60页 |
| 5.1.3 实验所用菌株及质粒 | 第60页 |
| 5.2 实验方法 | 第60-64页 |
| 5.2.1 DNA聚合酶纳米抗体重组表达载体的构建 | 第60-62页 |
| 5.2.2 纳米抗体的蛋白表达与纯化 | 第62-63页 |
| 5.2.3 活性分析 | 第63-64页 |
| 5.3 实验结果 | 第64-68页 |
| 5.3.1 DNA聚合酶纳米抗体表达载体的构建 | 第64-65页 |
| 5.3.2 DNA聚合酶纳米抗体的诱导表达与蛋白纯化 | 第65-66页 |
| 5.3.3 纳米抗体活性分析 | 第66-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-69页 |
| 5.5 小结 | 第69-70页 |
| 第6章 结论与展望 | 第70-71页 |
| 6.1 结论 | 第70页 |
| 6.2 进一步工作方向 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录A 实验仪器 | 第78-79页 |
| 附录B 氨基酸基本信息表 | 第79-80页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第80页 |
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