| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第16-28页 |
| 1.1 链霉菌及纺锤链霉菌SD-07简介 | 第16-18页 |
| 1.1.1 链霉菌简介 | 第16-17页 |
| 1.1.2 纺锤链霉菌SD-07简介 | 第17-18页 |
| 1.2 抗生素及多烯大环内酯类抗生素简介 | 第18-22页 |
| 1.2.1 抗生素简介 | 第18-19页 |
| 1.2.2 多烯大环内酯类抗生素简介 | 第19-22页 |
| 1.3 多烯大环内酯类抗生素合成基因簇的克隆和测序 | 第22-25页 |
| 1.4 链霉菌遗传转移体系建立的方法简介 | 第25-27页 |
| 1.5 本文的研究意义和主要内容 | 第27-28页 |
| 2 材料和方法 | 第28-45页 |
| 2.1 材料 | 第28-33页 |
| 2.1.1 菌株 | 第28-29页 |
| 2.1.2 质粒 | 第29页 |
| 2.1.3 PCR引物 | 第29页 |
| 2.1.4 基因组文库抗生素合成基因簇阳性克隆筛选探针序列 | 第29-30页 |
| 2.1.5 培养基和化学试剂 | 第30-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-45页 |
| 2.2.1 链霉菌培养和菌种保藏 | 第33-34页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.3 链霉菌总DNA提取 | 第35-36页 |
| 2.2.4 DNA片段的回收 | 第36页 |
| 2.2.5 CaCl_2制备大肠杆菌感受态细胞和转化 | 第36-37页 |
| 2.2.6 纺锤链霉菌SD-07基因组文库构建 | 第37-40页 |
| 2.2.6.1 质粒载体的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.6.2 链霉菌SD-07基因组DNA的制备 | 第38页 |
| 2.2.6.3 基因组的部分酶切 | 第38-39页 |
| 2.2.6.4 基因组酶切片段的回收及与载体的连接 | 第39页 |
| 2.2.6.5 连接产物的包装 | 第39页 |
| 2.2.6.6 包装产物的转染 | 第39-40页 |
| 2.2.7 纺锤链霉菌SD-07基因组文库CA-SD07抗生素合成基因簇克隆筛选-southern blot | 第40-42页 |
| 2.2.7.1 准备工作 | 第40-41页 |
| 2.2.7.2 预杂交 | 第41-42页 |
| 2.2.7.3 洗膜及显色 | 第42页 |
| 2.2.8 电穿孔法转化链霉菌SD-07 | 第42页 |
| 2.2.9 大肠杆菌和链霉菌属间接合转移 | 第42-43页 |
| 2.2.9.1 供体菌的准备 | 第42-43页 |
| 2.2.9.2 受体菌的准备 | 第43页 |
| 2.2.9.3 大肠杆菌和链霉菌属间接合转移 | 第43页 |
| 2.2.10 转化子和接合子的PCR验证 | 第43-44页 |
| 2.2.11 生物信息学分析 | 第44-45页 |
| 3 实验结果与分析讨论 | 第45-83页 |
| 3.1 纺锤链霉菌全基因组扫描测序和CA-SD07抗生素合成基因簇基因功能的初步分析及预测 | 第45-54页 |
| 3.1.1 全基因组扫描测序概述 | 第45页 |
| 3.1.2 抗生素合成基因簇PKS分析 | 第45-54页 |
| 3.2 纺锤链霉菌全基因组文库及抗生素合成基因簇亚克隆文库 | 第54-60页 |
| 3.2.1 质粒的提取及酶切 | 第54页 |
| 3.2.2 纺锤链霉菌SD-07基因组及其部分酶切 | 第54-55页 |
| 3.2.3 纺锤链霉菌SD-07基因组文库构建 | 第55-57页 |
| 3.2.4 CA-SD07抗生素合成基因簇亚克隆文库的筛选-Southern Blot | 第57-59页 |
| 3.2.5 纺锤链霉菌基因组文库构建小结 | 第59-60页 |
| 3.3 纺锤链霉菌SD-07遗传操作系统的建立 | 第60-83页 |
| 3.3.1 接合转移 | 第60-65页 |
| 3.3.1.1 纺锤链霉菌SD-07抗生素敏感试验 | 第60-61页 |
| 3.3.1.2 复制型质粒pJTU1278的接合转移 | 第61-62页 |
| 3.3.1.3 整合型质粒的接合转移 | 第62-65页 |
| 3.3.2 接合转移提条件优化 | 第65-77页 |
| 3.3.2.1 接合转移培养基的筛选优化 | 第65-67页 |
| 3.3.2.2 纺锤链霉菌孢子热激和孢子预萌发条件优化 | 第67-70页 |
| 3.3.2.3 供受体比例对接合转移效率的影响 | 第70页 |
| 3.3.2.4 Mg~(2+),Ca~(2+)及甘氨酸对接合转移效率的影响 | 第70-74页 |
| 3.3.2.5 Ca~(2+)在不同链霉菌中对接合转移效率的提高 | 第74-75页 |
| 3.3.2.6 抗生素覆盖时间及其使用浓度 | 第75-76页 |
| 3.3.2.7 接合转移条件优化小结 | 第76-77页 |
| 3.3.3 电转化 | 第77-83页 |
| 3.3.3.1 溶菌酶对菌丝体成活率及电转化率的影响 | 第77-79页 |
| 3.3.3.2 电击强度对体成活率及电转化率的影响 | 第79-80页 |
| 3.3.3.3 抗生素覆盖时间对电转化率的影响 | 第80-82页 |
| 3.3.3.4 电转化结果分析 | 第82-83页 |
| 4 全文总结与展望 | 第83-86页 |
| 4.1 本文的主要内容及成果 | 第83-84页 |
| 4.2 对进一步研究的展望 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第96页 |
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