摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-11页 |
引言 | 第11-21页 |
1 草鱼呼肠孤病毒 | 第11-16页 |
·病毒的基因与编码蛋白 | 第11-12页 |
·病毒与细胞的相互作用 | 第12-14页 |
·GCRV 对宿主细胞生理功能的影响 | 第14-16页 |
2 RNA 干扰途径 | 第16-19页 |
·RNA 干扰途径的发现 | 第16-17页 |
·RNA 干扰机制 | 第17-18页 |
·RNA 干扰途径的特点 | 第18页 |
·RNAi 在水生生物中的应用 | 第18-19页 |
3 本文研究的目的及意义 | 第19-20页 |
4 本文的主要内容 | 第20-21页 |
第一章 草鱼肾细胞中 RNAi 存在的验证 | 第21-34页 |
1 材料与方法 | 第21-29页 |
·仪器与设备 | 第21页 |
·药品与试剂 | 第21-23页 |
·所用软件 | 第23页 |
·实验方法 | 第23-29页 |
2 结果 | 第29-32页 |
·琼脂糖凝胶电泳结果 | 第29-30页 |
·细胞水平上转染 dsRNA 对 egfp 表达的影响 | 第30-31页 |
·转染 dsRNA 对 egfp mRNA 转录水平的影响 | 第31-32页 |
3 讨论 | 第32-34页 |
第二章 草鱼呼肠孤病毒感染对草鱼细胞 RNAi 信号通路激活方式的影响 | 第34-53页 |
第一节 GCRV 裸链 dsRNA 基因组与 RNAi 的相互作用 | 第34-39页 |
1 材料与方法 | 第34-36页 |
·仪器与设备 | 第34页 |
·药品与试剂 | 第34页 |
·实验方法 | 第34-36页 |
2 结果 | 第36-37页 |
·病毒滴度的测定结果 | 第36-37页 |
·Norther Blot 测定病毒 S10 基因组片段特异小分子 RNA 生成量 | 第37页 |
3 讨论 | 第37-39页 |
第二节 GCRV 的感染对 siRNA 介导的基因沉默的影响 | 第39-43页 |
1 材料与方法 | 第39-40页 |
·仪器与设备 | 第39页 |
·药品与试剂 | 第39页 |
·实验方法 | 第39-40页 |
2 结果 | 第40-42页 |
·荧光显微镜观察 | 第40-41页 |
·qRT-PCR 测定 egfp 的表达量 | 第41-42页 |
3 讨论 | 第42-43页 |
第三节 GCRV 的复制与 Dicer 基因转录水平的相互关系 | 第43-53页 |
1 材料与方法 | 第43-44页 |
·仪器与设备 | 第43页 |
·试剂 | 第43页 |
·实验方法 | 第43-44页 |
2 结果 | 第44-51页 |
·qRT-PCR 测定 Dicer 基因表达情况 | 第44-45页 |
·TCID_(50)测病毒滴度 | 第45-51页 |
·Dicer mRNA 表达水平与病毒滴度相关性分析 | 第51页 |
3 讨论 | 第51-53页 |
结语 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-61页 |
附录:论文发表情况 | 第61-62页 |
致谢 | 第62页 |