摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
英文缩写词表 | 第7-11页 |
前言 | 第11-19页 |
第一部分 p53蛋白研究概况 | 第11-13页 |
1. p53简介 | 第11页 |
2. p53分子结构 | 第11-12页 |
3. p53蛋白生物功能 | 第12-13页 |
4. p53与HBV作用 | 第13页 |
第二部分 穿膜肽TAT的分子结构和功能研究 | 第13-15页 |
1. 穿膜肽简介 | 第13-14页 |
2. TAT的分子结构 | 第14-15页 |
3. TAT功能应用 | 第15页 |
第三部分 乙型肝炎病毒HBV研究概况 | 第15-19页 |
1. HBV简介 | 第15-16页 |
2. HBV的病毒特征 | 第16-17页 |
3. HBV的复制 | 第17-18页 |
4. HBV的治疗策略 | 第18-19页 |
材料和方法 | 第19-41页 |
第一部分 实验材料 | 第19-24页 |
1. 质粒及细胞系 | 第19页 |
2. PCR引物 | 第19-20页 |
3. 主要试剂及试剂盒 | 第20页 |
4. 实验仪器 | 第20-21页 |
5. 相关溶液的配制方法 | 第21-24页 |
第二部分 实验方法 | 第24-39页 |
1. 质粒构建 | 第24-25页 |
2. 细胞培养 | 第25页 |
3. 细胞转染 | 第25-26页 |
4. ELISA实验 | 第26页 |
5. Western blotting检测蛋白的表达水平 | 第26-28页 |
6. 染色质免疫共沉淀(CHIP) | 第28-30页 |
7. 亚细胞蛋白质组提 | 第30-31页 |
8. Daul-Luciferase报告基因监测系统 | 第31-32页 |
9. 免疫组化 | 第32-33页 |
10. 胞内免疫荧光染色 | 第33页 |
11. 提取培养上清总DNA和荧光定量PCR | 第33-34页 |
12. CCK-8检测细胞增殖 | 第34-35页 |
13. Southern blotting检测DNA的复制水平 | 第35-37页 |
14. TAT-GST融合蛋白诱导表达条件的优化和纯化 | 第37页 |
15. 包涵体蛋白的诱导表达和纯化 | 第37-38页 |
16. 内毒素的去除与检测 | 第38-39页 |
17. 小鼠实验 | 第39页 |
第三部分 统计分析 | 第39-41页 |
结果 | 第41-53页 |
1、蛋白的表达纯化 | 第41-42页 |
2、TAT介导重组的TAT-p53进入细胞 | 第42-44页 |
3、TAT-p53抑制HBV的表达和复制的剂量选择 | 第44-46页 |
4、TAT-p53抑制HBV的机制研究 | 第46-48页 |
5、TAT-p53抑制HBsAg的产生 | 第48-50页 |
6、TAT-p53在HBV转基因鼠中对HBV表达和复制的抑制作用 | 第50-53页 |
讨论 | 第53-55页 |
结论 | 第55-57页 |
主要参考文献 | 第57-63页 |
攻读学位期间成果 | 第63-65页 |
致谢 | 第65-66页 |