| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| 1.1 淀粉 | 第12-13页 |
| 1.2 淀粉酶 | 第13-19页 |
| 1.2.1 介绍 | 第13页 |
| 1.2.2 结构域 | 第13-16页 |
| 1.2.3 催化机制和活性位点的底物结合 | 第16-18页 |
| 1.2.4 底物结合裂缝 | 第18页 |
| 1.2.5 α-淀粉酶作用于淀粉 | 第18-19页 |
| 1.3 α-淀粉酶在工业上的应用 | 第19-20页 |
| 1.3.1 淀粉转化 | 第19页 |
| 1.3.2 洗涤工业 | 第19页 |
| 1.3.3 燃料酒精的生产 | 第19页 |
| 1.3.4 食品工业 | 第19-20页 |
| 1.3.5 纺织工业 | 第20页 |
| 1.3.6 造纸工业 | 第20页 |
| 1.4 麦芽糖α-淀粉酶 | 第20-21页 |
| 1.5 麦芽糖α-淀粉酶的产麦芽糖机制 | 第21-24页 |
| 1.5.1 M.melanosporea麦芽糖a-淀粉酶作用于麦芽三糖 | 第21-22页 |
| 1.5.2 M.melanosporea麦芽糖a-淀粉酶作用于麦芽五糖 | 第22-23页 |
| 1.5.3 M.melanosporea麦芽糖a-淀粉酶作用于麦六芽五糖 | 第23-24页 |
| 1.6 新型麦芽糖α-淀粉酶的获取 | 第24-25页 |
| 1.7 定点突变 | 第25页 |
| 1.8 本课题的目的和意义 | 第25页 |
| 1.9 技术路线 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-36页 |
| 2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 培养基和溶液配制 | 第27页 |
| 2.1.3 酶与试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第28页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第28-32页 |
| 2.2.1 重组菌的培养 | 第28页 |
| 2.2.2 重组菌质粒DNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态的制备 | 第28页 |
| 2.2.4 重组质粒的转化 | 第28页 |
| 2.2.5 重组子质粒酶切验证 | 第28页 |
| 2.2.6 重组菌株的诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.2.7 淀粉酶的纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30页 |
| 2.2.9 麦芽糖α-淀粉酶酶活的测定 | 第30页 |
| 2.2.10 葡萄糖标准曲线的测定 | 第30页 |
| 2.2.11 蛋白质浓度的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.12 重组麦芽糖α-淀粉酶酶学性质的研究 | 第31页 |
| 2.2.13 HPLC对重组麦芽糖α-酶水解淀粉产物的分析 | 第31-32页 |
| 2.3 T.fusca麦芽糖α-淀粉酶(Tfa)和S.viridis麦芽糖α-淀粉酶(Sva)的分子改造 | 第32-36页 |
| 2.3.1 同源建模 | 第32页 |
| 2.3.2 麦芽糖α-淀粉酶基因突变位点的选择 | 第32-33页 |
| 2.3.3 麦芽糖α-淀粉酶基因突变位点PCR引物的设计 | 第33-34页 |
| 2.3.4 突变的反向PCR扩增 | 第34页 |
| 2.3.5 反向PCR法介导的麦芽糖α-淀粉酶分子改造 | 第34-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-61页 |
| 3.1 理性设计 | 第36-41页 |
| 3.1.1 同源建模及模型分析 | 第36-37页 |
| 3.1.2 突变点的选择 | 第37-38页 |
| 3.1.3 定点突变表达质粒的构建 | 第38-40页 |
| 3.1.4 突变型Tfa和Sva基因的序列测定 | 第40-41页 |
| 3.1.5 Tfa和Sva野生型和突变型基因表达产物的SDS-PAGE分析 | 第41页 |
| 3.2 T.fusca麦芽糖α-淀粉酶和突变酶酶学性质比较 | 第41-53页 |
| 3.2.1 T.fusca麦芽糖α-淀粉酶和突变酶的最适pH | 第41-45页 |
| 3.2.2 T.fusca麦芽糖α-淀粉酶和突变酶的pH稳定性 | 第45-47页 |
| 3.2.3 T.fusca麦芽糖α-淀粉酶和突变酶的最适温度 | 第47-48页 |
| 3.2.4 T.fusca麦芽糖α-淀粉酶和突变酶的温度稳定性 | 第48-49页 |
| 3.2.5 T.fusca麦芽糖α-淀粉酶和突变酶的比活以及Km值的测定 | 第49-51页 |
| 3.2.6 T.fusca麦芽糖α-淀粉酶及突变酶水解特性的研究 | 第51-53页 |
| 3.3 S.viridis麦芽糖α-淀粉酶和突变酶酶学性质比较 | 第53-61页 |
| 3.3.1 S.viridis麦芽糖α-淀粉酶和突变酶最适pH以及pH稳定性的比较 | 第53-55页 |
| 3.3.2 S.viridis麦芽糖α-淀粉酶和突变酶最适温度以及温度稳定性的比较 | 第55-57页 |
| 3.3.3 S.viridis麦芽糖α-淀粉酶和突变酶的比活以及Km值的测定 | 第57-58页 |
| 3.3.4 S.viridis麦芽糖α-淀粉酶及突变酶水解特性的研究 | 第58-61页 |
| 第四章 讨论 | 第61-65页 |
| 4.1 T.fusca麦芽糖α-淀粉酶和S.viridis麦芽糖α-淀粉酶的分子改造 | 第61-62页 |
| 4.1.1 同源建模 | 第61页 |
| 4.1.2 突变位点的选择 | 第61-62页 |
| 4.2 T.fusca麦芽糖突变酶的分析 | 第62-63页 |
| 4.3 S.viridis麦芽糖突变酶的分析 | 第63-65页 |
| 第五章 结论与展望 | 第65-68页 |
| 5.1 结论 | 第65-67页 |
| 5.2 问题与展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录1 | 第73-76页 |
| 附录2 | 第76-81页 |
| 附录3 | 第81-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第98页 |
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