| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 缩写词表 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 引言 | 第10-13页 |
| 1.1 玉米大斑病 | 第10页 |
| 1.2 黑色素性质及功能 | 第10-11页 |
| 1.2.1 黑色素性质 | 第10页 |
| 1.2.2 黑色素功能 | 第10-11页 |
| 1.2.3 黑色素与致病力关系 | 第11页 |
| 1.3 黑色素合成途径及其相关基因 | 第11-12页 |
| 1.4 本论文的研究内容和意义 | 第12-13页 |
| 2 材料和方法 | 第13-22页 |
| 2.1 供试菌株、质粒和寄主 | 第13页 |
| 2.2 供试培养基 | 第13页 |
| 2.3 供试试剂、溶液 | 第13页 |
| 2.4 主要仪器和设备 | 第13-14页 |
| 2.5 玉米大斑病菌基因组 DNA、RNA 及大肠杆菌质粒的提取 | 第14-15页 |
| 2.5.1 玉米大斑病菌基因组 DNA 的提取 | 第14页 |
| 2.5.2 总 RNA 的提取及 cDNA 的合成 | 第14页 |
| 2.5.3 大肠杆菌质粒的提取 | 第14-15页 |
| 2.6 St3HNR 和 St4HNR 蛋白间的互补功能预测 | 第15页 |
| 2.7 St3HNR 基因及 St4HNR 基因表达载体的构建 | 第15-18页 |
| 2.7.1 St3HNR 基因及 St4HNR 基因表达载体构建策略 | 第15页 |
| 2.7.2 St3HNR 与 St4HNR 全序列的 PCR 扩增 | 第15-16页 |
| 2.7.3 PCR 产物的回收、连接 | 第16页 |
| 2.7.4 连接产物的克隆、测序 | 第16-17页 |
| 2.7.5 目的片段与表达载体的连接、验证 | 第17-18页 |
| 2.8 St3HNR 与 St4HNR 基因表达转化子创制 | 第18-19页 |
| 2.8.1 玉米大斑病菌原生质体转化 | 第18-19页 |
| 2.8.2 转化子 PCR 验证 | 第19页 |
| 2.8.3 转化子的 Southern blotting 验证 | 第19页 |
| 2.8.4 突变体的半定量 RT-PCR 分析 | 第19页 |
| 2.9 突变体分析 | 第19-22页 |
| 2.9.1 突变体表型分析 | 第19-20页 |
| 2.9.2 突变体生长速率测定 | 第20页 |
| 2.9.3 黑色素产量分析 | 第20页 |
| 2.9.4 突变菌株的组织病理学分析 | 第20-21页 |
| 2.9.5 突变菌株 HT-毒素分析 | 第21-22页 |
| 3 结果与分析 | 第22-33页 |
| 3.1 St3HNR 基因和 St4HNR 基因生物信息学分析 | 第22-25页 |
| 3.1.1 St3HNR 和 St4HNR 蛋白进化树分析 | 第22页 |
| 3.1.2 St3HNR 基因和 St4HNR 基因保守结构域分析 | 第22-23页 |
| 3.1.3 St3HNR 和 St4HNR 的蛋白质结构预测 | 第23-25页 |
| 3.2 St3HNR 基因及 St4HNR 基因表达载体构建 | 第25-26页 |
| 3.2.1 St3HNR 与 St4HNR 全基因序列克隆 | 第25页 |
| 3.2.2 St3HNR、St4HNR 基因表达载体的酶切验证 | 第25-26页 |
| 3.3 St3HNR 基因及 St4HNR 基因表达转化子获得 | 第26-28页 |
| 3.3.1 转化子的 PCR 验证 | 第26-27页 |
| 3.3.2 转化子的 Southern blotting 验证 | 第27页 |
| 3.3.3 突变体荧光显微观察 | 第27-28页 |
| 3.3.4 突变体的 RT-PCR 分析 | 第28页 |
| 3.4 回复突变体和超表达突变体表型分析 | 第28-33页 |
| 3.4.1 突变体的菌落、菌丝形态观察 | 第28-30页 |
| 3.4.2 突变体生长速度的测定 | 第30-31页 |
| 3.4.3 突变体的胞内黑色素分析 | 第31页 |
| 3.4.4 突变体的致病力分析 | 第31-32页 |
| 3.4.5 突变体的粗毒素生物活性测定 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 5 结论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-40页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第40-41页 |
| 作者简历 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
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