| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 缩略语表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-34页 |
| 1 卵巨球蛋白的含量与分离纯化 | 第17-18页 |
| 1.1 卵巨球蛋白的分布与含量 | 第17-18页 |
| 1.2 卵巨球蛋白的分离纯化方法 | 第18页 |
| 2 卵巨球蛋白的结构 | 第18-20页 |
| 2.1 分子量及亚基组装 | 第18-19页 |
| 2.2 一级结构-氨基酸序列 | 第19页 |
| 2.3 四级结构-分子形态 | 第19-20页 |
| 3 蛋白质三维结构研究方法 | 第20-25页 |
| 3.1 X-射线晶体学技术 | 第20-21页 |
| 3.2 核磁共振波谱技术 | 第21-22页 |
| 3.3 冷冻电镜-三维重构技术 | 第22-23页 |
| 3.4 鸡蛋清蛋白质分子结构研究 | 第23-25页 |
| 4 蛋白质糖基化结构研究方法 | 第25-27页 |
| 4.1 糖链比例的测定 | 第25页 |
| 4.2 糖基化位点的鉴定 | 第25-26页 |
| 4.3 糖链和糖肽结构的解析 | 第26-27页 |
| 5 卵巨球蛋白的生物活性 | 第27-31页 |
| 5.1 蛋白酶抑制特性 | 第27-29页 |
| 5.2 治疗角膜炎 | 第29页 |
| 5.3 促进伤口愈合 | 第29-30页 |
| 5.4 抑制败血症 | 第30页 |
| 5.5 抑制缓激肽生成 | 第30页 |
| 5.6 卵巨球蛋白与癌症 | 第30页 |
| 5.7 卵巨球蛋白生物活性的作用机制 | 第30-31页 |
| 5.8 卵巨球蛋白与血清 α_2-巨球蛋白的进化关系 | 第31页 |
| 6 研究目的及主要内容 | 第31-34页 |
| 6.1 研究目的与意义 | 第31-32页 |
| 6.2 主要研究内容 | 第32-34页 |
| 第二章 聚乙二醇沉淀-阴离子交换层析分离蛋清蛋白质 | 第34-50页 |
| 1 材料与方法 | 第35-39页 |
| 1.1 材料 | 第35-36页 |
| 1.1.1 原料 | 第35页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第35-36页 |
| 1.2 方法 | 第36-39页 |
| 1.2.1 鸡蛋清溶液的制备 | 第36页 |
| 1.2.2 聚乙二醇分级沉淀 | 第36页 |
| 1.2.3 卵粘蛋白的纯化 | 第36页 |
| 1.2.4 阴离子交换层析分离沉淀B、C和上清D | 第36-37页 |
| 1.2.5 SDS-PAGE分析 | 第37-38页 |
| 1.2.6 高效液相色谱法测定纯度 | 第38页 |
| 1.2.7 生物活性的测定 | 第38-39页 |
| 1.2.8 提取率的计算 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-47页 |
| 2.1 蛋清蛋白质预分离 | 第39-40页 |
| 2.2 卵粘蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| 2.3 沉淀B、C和上清液D中蛋白质的分离纯化 | 第41-43页 |
| 2.4 蛋白质纯度的高效液相色谱法分析 | 第43-45页 |
| 2.5 溶菌酶、卵转铁蛋白和卵黄素蛋白的生物活性 | 第45-46页 |
| 2.6 蛋白质的提取率 | 第46-47页 |
| 3 结论与讨论 | 第47-50页 |
| 3.1 结论 | 第47-48页 |
| 3.2 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 两步层析法纯化卵巨球蛋白 | 第50-62页 |
| 1 材料与方法 | 第50-54页 |
| 1.1 材料 | 第50-51页 |
| 1.1.1 原料 | 第50页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第50-51页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第51页 |
| 1.2 方法 | 第51-54页 |
| 1.2.1 鸡蛋清溶液的制备 | 第51-52页 |
| 1.2.2 聚乙二醇分级沉淀 | 第52页 |
| 1.2.3 阴离子交换层析 | 第52页 |
| 1.2.4 超滤浓缩 | 第52-53页 |
| 1.2.5 凝胶过滤层析 | 第53页 |
| 1.2.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第53页 |
| 1.2.7 提取率计算 | 第53页 |
| 1.2.8 质谱鉴定 | 第53-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-59页 |
| 2.1 聚乙二醇分级沉淀条件优化结果 | 第54-55页 |
| 2.2 阴离子交换层析分离结果 | 第55-56页 |
| 2.3 凝胶过滤层析纯化结果 | 第56-57页 |
| 2.4 两步层析法的纯度和提取率 | 第57-58页 |
| 2.5 卵巨球蛋白样品的质谱鉴定结果 | 第58-59页 |
| 3 结论与讨论 | 第59-62页 |
| 3.1 结论 | 第59-60页 |
| 3.2 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 卵巨球蛋白纯化方法的优化 | 第62-75页 |
| 1 材料与方法 | 第62-65页 |
| 1.1 材料 | 第62-63页 |
| 1.1.1 原料 | 第62页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第62-63页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第63页 |
| 1.2 方法 | 第63-65页 |
| 1.2.1 鸡蛋清溶液的制备 | 第63页 |
| 1.2.2 聚乙二醇分级沉淀浓度范围的优化 | 第63页 |
| 1.2.3 凝胶过滤层析参数的优化 | 第63-64页 |
| 1.2.4 卵巨球蛋白生物活性的检测 | 第64页 |
| 1.2.5 原子力显微镜观察卵巨球蛋白的分子形态 | 第64-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-73页 |
| 2.1 聚乙二醇分级沉淀条件优化结果 | 第65-66页 |
| 2.2 凝胶过滤层析的优化结果 | 第66-69页 |
| 2.2.1 层析填料和基本层析参数的选择 | 第66-67页 |
| 2.2.2 凝胶过滤层析流动相流速的优化 | 第67-68页 |
| 2.2.3 凝胶过滤层析进样量的优化 | 第68-69页 |
| 2.3 卵巨球蛋白的纯度与提取率 | 第69-71页 |
| 2.4 卵巨球蛋白生物活性的测定 | 第71-72页 |
| 2.5 卵巨球蛋白的分子形态 | 第72-73页 |
| 3 结论与讨论 | 第73-75页 |
| 3.1 结论 | 第73-74页 |
| 3.2 讨论 | 第74-75页 |
| 第五章 卵巨球蛋白糖基化结构解析 | 第75-90页 |
| 1 材料与方法 | 第76-80页 |
| 1.1 材料 | 第76-77页 |
| 1.1.1 原料 | 第76页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第76-77页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第77页 |
| 1.2 实验方法 | 第77-80页 |
| 1.2.1 卵巨球蛋白样品制备 | 第77页 |
| 1.2.2 MALDI-TOF MS测定卵巨球蛋白亚基分子量 | 第77页 |
| 1.2.3 PNGase F去糖基化处理及酶解 | 第77-78页 |
| 1.2.4 HPLC-ESI-MS/MS鉴定卵巨球蛋白N-糖基化位点 | 第78页 |
| 1.2.5 二维电泳及蛋白点鉴定 | 第78-79页 |
| 1.2.6 生物信息学分析 | 第79-80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-87页 |
| 2.1 卵巨球蛋白分子量及糖链比例 | 第80-81页 |
| 2.2 卵巨球蛋白N-糖基化位点 | 第81-84页 |
| 2.3 卵巨球蛋白与其他鸟类巨球蛋白N-糖基化位点的比对 | 第84-86页 |
| 2.4 卵巨球蛋白糖基化的不均一性 | 第86-87页 |
| 3 结论与讨论 | 第87-90页 |
| 3.1 结论 | 第87-88页 |
| 3.2 讨论 | 第88-90页 |
| 第六章 卵巨球蛋白与金属离子相互作用特性的研究 | 第90-101页 |
| 1 材料与方法 | 第90-92页 |
| 1.1 材料 | 第90-91页 |
| 1.1.1 原料 | 第90-91页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第91页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第91页 |
| 1.2 方法 | 第91-92页 |
| 1.2.1 卵巨球蛋白分离纯化 | 第91页 |
| 1.2.2 金属离子对卵巨球蛋白荧光光谱的影响 | 第91-92页 |
| 1.2.3 Cu~(2+)、Fe~(3+)与卵巨球蛋白结合参数的计算 | 第92页 |
| 1.2.4 同步荧光光谱扫描 | 第92页 |
| 1.2.5 圆二色光谱（CD）的测定 | 第92页 |
| 1.2.6 傅里叶变换红外光谱（FT-IR）的测定 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-99页 |
| 2.1 金属离子对卵巨球蛋白荧光光谱的影响 | 第92-94页 |
| 2.2 Cu~(2+)、Fe~(3+)与卵巨球蛋白的结合参数 | 第94-95页 |
| 2.3 Cu~(2+)、Fe~(3+)与卵巨球蛋白的同步荧光光谱 | 第95-97页 |
| 2.4 Cu~(2+)、Fe~(3+)对卵巨球蛋白二级结构的影响 | 第97-99页 |
| 3 结论与讨论 | 第99-101页 |
| 3.1 结论 | 第99页 |
| 3.2 讨论 | 第99-101页 |
| 第七章 卵巨球蛋白调控成纤维细胞迁移特性的研究 | 第101-122页 |
| 1 材料与方法 | 第102-110页 |
| 1.1 材料 | 第102-104页 |
| 1.1.1 原料 | 第102页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第102-103页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第103-104页 |
| 1.2 方法 | 第104-110页 |
| 1.2.1 卵巨球蛋白的制备 | 第104页 |
| 1.2.2 细胞培养及细胞生长曲线 | 第104-105页 |
| 1.2.3 细胞增殖的测定 | 第105-106页 |
| 1.2.4 细胞迁移的测定 | 第106-107页 |
| 1.2.5 细胞粘附的测定 | 第107页 |
| 1.2.6 总RNA提取与实时荧光定量PCR（RT-qPCR） | 第107-109页 |
| 1.2.7 免疫印迹分析（WB） | 第109-110页 |
| 1.2.8 数据处理 | 第110页 |
| 2 结果与分析 | 第110-119页 |
| 2.1 小鼠 3T6细胞的生长曲线 | 第110-111页 |
| 2.2 卵巨球蛋白对小鼠 3T6细胞生长与活力的影响 | 第111-112页 |
| 2.3 卵巨球蛋白对小鼠 3T6细胞增殖周期的影响 | 第112-113页 |
| 2.4 卵巨球蛋白对小鼠 3T6细胞迁移的影响 | 第113页 |
| 2.5 卵巨球蛋白对人皮肤成纤维细胞（HSF）迁移和粘附的影响 | 第113-114页 |
| 2.6 卵巨球蛋白对HSF细胞迁移相关基因的调控作用 | 第114-118页 |
| 2.6.1 细胞生长因子 | 第114-116页 |
| 2.6.2 细胞粘附分子 | 第116-117页 |
| 2.6.3 细胞骨架蛋白 | 第117-118页 |
| 2.7 卵巨球蛋白促进成纤维细胞迁移作用机制的分析 | 第118-119页 |
| 3 结论与讨论 | 第119-122页 |
| 3.1 结论 | 第119-120页 |
| 3.2 讨论 | 第120-122页 |
| 第八章 结论与创新点 | 第122-126页 |
| 1 主要结论 | 第122-124页 |
| 2 创新点 | 第124页 |
| 3 展望 | 第124-126页 |
| 参考文献 | 第126-142页 |
| 作者简介 | 第142-143页 |
| 课题研究成果 | 第143-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |
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