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塞曼石墨炉原子吸收法直接测定微量血清中铝

【中医药大学毕业论文】作者:梁峰,徐群清,陆贤杰, 梁丽艳【摘要】 目的 研究测定人体血清中微量铝含量的新方法。方法 血样经HNO3浸出离心去蛋白处理,采用塞曼石墨炉原子吸收光谱法测定铝元素含量。结果 方法的检测限为0~1μg/L;线性范围为0~5μg/L,相对标准偏差(RSD)为2.54%,回收率为96.5%~103%。结论 方法可靠,操作简便快速,适用于临床医学检验中的诊断分析。
【关键词】 原子吸收; 血清; 铝
【Abstract】 Objective To study a new method for the determination of micro-aluminum in the human serum sample. Methods The blood samples were treated with HNO3 and the blood allumin was removed centrifugally. The content of aluminum was determined by Zeeman Graphite Furnace Atomic Absorption Spectrometry (GFAAS). Results The detection limit of this method was 0~1μg/L, the linear range was 0~5μg/L , relatve standard deviation(RSD) was 2.54%,and the recovery rate was 96.5%~103%.Conclusion This method is credible, simple and fast, and suitable for the diagnosis and analysis of clinical medical examination.
【Key words】 GFAAS;serum;aluminum
近年来国内有关铝与人类疾病的研究结果表明,铝与肾病、高血压、糖尿病、早老性痴呆、肿瘤等疾病的发生、发展有密切的关系。因此,准确、快速地检测生物样品中微量铝,提高临床诊断水平仍然是实验室技术探讨的热门课题。为此,笔者于2008年在开展相关的课题项目研究过程中,参考国内有关文献[1~5]用原子吸收光谱法测定生物样品中金属元素含量的经验,采用塞曼石墨炉原子吸收法,以适当的基本改进剂稀释样品,对正常人体血清铝水平进行了分析测试,取得了较好的结果。
  1 实验部分
1.1 原理 注入石墨炉的样品经原子化后,其中待测元素铝的基态原子吸收来自铝空心阴极灯发出的特征谱线,在一定范围内,吸光度与其浓度成正比,可通过标准曲线定量求得铝的含量。
1.2 主要仪器及试剂 标准溶液试剂为北京国家钢铁研究总院1000μg/ml(GSBG62006-09)。铝标准贮备液1μg/ml AI,0.08mol/L优级纯硝酸镁介质,用时逐级稀释至0.1μg/ml AI。
1.3 仪器工作条件 日立-7000型偏振塞曼原子吸收分光光度计,日立石墨炉原子化器,日立A1空心阴极灯,日立自动进样器,日立数据处理机,日立涂层石墨管,法国制Eppendorf 20μl微量取样器。波长:309.3nm;灯电流:10mA;狭缝:1.3nm;高纯氩气流量150ml/min,原子化时氩气流量:30ml/min;测量方式:峰高积分吸收;进样方式:自动进样;进样体积:20μl;校正模式:标准曲线;背景校正塞曼效应;计算方式:浓度直读。
石墨炉升温程序:干燥60~100℃,30s;灰化500~500℃,30s;原子化2600~2600℃,5s;清洗2800~2800℃,3s。
1.4 实验方法 标准曲线的绘制,本实验结果表明铝浓度在≤5μg/L时与吸光度呈线性关系。分别取0.1μg/ml AI标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml于10ml试管中,以0.08mol/L硝酸镁稀释至刻度,混匀后按仪器设定的工作程序测定吸光度,绘制标准曲线。
1.5 样品分析 血样来自受检者于清晨空腹取肘静脉血2ml,不加抗凝剂,3000r/min离心10min。取0.5ml血清放入洁净的小试管中,加入适量0.08mol/L硝酸镁介质经振摇后以3000r/min离心5min,取上层清液直接进样20μl,同时做试剂空白。样品的吸光度经试样空白校正后,在标准曲线上直读浓度,结果乘上稀释倍数即得血清铝的含量。
  2 结果
2.1 回归方程及检出限 本实验标准曲线的回归方程式为Y=1.343X+3.646,相关系数r=0.9996,线性范围:0~5μg/L。
2.2 精密度试验 为了验证本方法的准确性,对经处理后含铝量为5μg/L的正常血清按测定步骤进行重复测定,取同一份血样0.5ml连续重复测定10次,结果见表1。从表1可见,各次测定的变异幅度不大(RSD=2.54%),相对标准偏差小于3%,表明本方法的重现性比较好。表1 精密度试验结果
2.3 方法的回收试验 为了验证方法的准确性与可靠性,按试验测定步骤,用标准加入法进行回收试验。从表2中看出,本方法的回收率在96.5%~103%,平均为98.5%,回收试验结果比较满意,见表2。表2 铝的回收试验结果注:计算公式:回收率(%)= 测得值 本底值+加入标准量×100%
2.4 血清中铝含量测定结果 本研究应用上述方法测定了210名铝作业工人和500名正常对照组的血清铝含量,铝作业组明显高于对照组,差异有非常显著性(t=24.19,P3 讨论
在石墨炉原子吸收分析过程中,血清样品不经任何处理直接引入原子化器的方式存在基体的严重干扰,影响结果的准确性。因此,以适当的基体改进剂稀释样品,可以克服粘度对进样的影响,降低背景吸收干扰。同时,由于血清粘度大会给取样本身带来误差,所以选择高性能的石墨管以提高分析灵敏度和精度,保证实验结果准确性是原子吸收分析的关键。
本实验方法选择了双光束具有自动背景校正的塞曼效应原子吸收光谱仪,结合酸解去蛋白法直接测定血清中铝的含量,结果表明,当血清中铝浓度为5.46μg/L时,测定的相对标准偏差为2.54%(n=10)。应用本法同时检测了500例正常对照组和210例铝作业工人血清中铝的含量,铝作业组明显高于正常组,差异有非常显著性(t=24.19,P【参考文献】
1 朱启星,沈 彤,李 菁,等. 石墨炉原子吸收光谱法测定儿童末梢血血铅含量. 中华预防医学杂志,2003,37(2):128-130.
2 熊丽萍,陈世件. 南昌市某医院住院病人血铝水平调查. 微量元素与健康研究,2003,20(6):39-40.
3 王晓琳.石墨炉原子吸收光谱法测定水中的镍.预防医学论坛,2009,15(3):241-242.
4 李述信.原子吸收光谱分析中的干扰及清除方法.北京:北京大学出版社,1987,237.
5 梁峰.铝与人类疾病研究现状. 微量元素与健康研究,2006,23(1):64-65.

 
 
 
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