| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1 骨骼肌肌纤维的类型及其特征,肌纤维与肉质的关系 | 第12-14页 |
| ·骨骼肌肌纤维的类型及其特征 | 第12-14页 |
| ·不同肌纤维类型与肉质的关系 | 第14页 |
| 2 肌纤维类型转化信号通路相关研究进展 | 第14-19页 |
| ·胰岛素样生长因子(IGFs)通路 | 第14-16页 |
| ·CaN-NFAT信号通路 | 第16-18页 |
| ·肌肉发生调控因子(myogenic regulatory factors,MRFs)调控途径 | 第18-19页 |
| 3 FHL3家族的研究进展 | 第19-23页 |
| ·LIM蛋白的特征、分类及其功能 | 第19-21页 |
| ·FHL家族成员及特点 | 第21-22页 |
| ·FHL3的结构特点和功能 | 第22-23页 |
| 4 RNA干涉技术 | 第23-25页 |
| 第二章 研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 第三章 材料与方法 | 第26-41页 |
| 1 试验材料 | 第26-29页 |
| ·试验样品 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第27-28页 |
| ·常用试剂及其配制 | 第28-29页 |
| 2 试验方法 | 第29-41页 |
| ·细胞培养 | 第29-31页 |
| ·FHL3 siRNA表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·FHL3 siRNAs的设计和合成 | 第31页 |
| ·FHL3 RNAi表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·FHL3 RNAi表达载体的鉴定和提取 | 第32页 |
| ·超纯质粒的提取 | 第32页 |
| ·化学合成FHL3-siRNA小片段的设计 | 第32-33页 |
| ·脂质体介导的细胞转染(6孔板) | 第33页 |
| ·细胞RNA的提取和cDNA的制备 | 第33-35页 |
| ·细胞RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·RNA的检测 | 第34页 |
| ·反转录反应 | 第34-35页 |
| ·FHL3及MyHC各亚型基因的表达分析 | 第35-38页 |
| ·Real-time PCR的引物设计 | 第35-37页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第37-38页 |
| ·定量数据分析 | 第38页 |
| ·western blot分析 | 第38-41页 |
| ·蛋白的提取 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第39页 |
| ·转膜 | 第39-40页 |
| ·免疫反应 | 第40页 |
| ·ECL化学发光检测 | 第40-41页 |
| 第四章 结果与分析 | 第41-52页 |
| 1 C2C12细胞分化 | 第41页 |
| 2 小鼠C2C12细胞总RNA的提取和反转录 | 第41-42页 |
| 3 分化不同时期的细胞 | 第42-45页 |
| ·目的基因FHL3、MyoD和MyHC各亚型基因在细胞分化不同时期的相对表达量 | 第42-44页 |
| ·目的蛋白FHL3在细胞分化不同时期的表达变化 | 第44-45页 |
| 4 FHL3基因的干扰分析 | 第45-52页 |
| ·FHL3 siRNA表达载体的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·FHL3 siRNA表达载体的转染效果 | 第46页 |
| ·荧光标记的化学合成FHL3-siRNA小片段的转染效果 | 第46-47页 |
| ·小干扰RNA片段对目的基因FHL3的影响 | 第47页 |
| ·siRNA#3转染48h后分化不同时间段细胞FHL3 mRNA水平的变化 | 第47-48页 |
| ·siRNA#3转染48h后分化不同时间段细胞FHL3蛋白水平的变化 | 第48-49页 |
| ·siRNAs#3转染后分化细胞的MyHC各亚型基因mRNA水平的变化 | 第49-50页 |
| ·分化不同时间段后转染siRNA#3细胞的FHL3和MyHC基因的变化 | 第50-52页 |
| 第五章 讨论 | 第52-56页 |
| 1 RNA干涉的效率 | 第52-53页 |
| ·siRNA片段设计技巧 | 第52页 |
| ·如何提高siRNAs的转染效率 | 第52-53页 |
| 2 FHL3在C2C12细胞分化过程中表达量的变化及其与对MYHC基因表达的影响 | 第53-54页 |
| 3 本实验在转染时间上的选择 | 第54-55页 |
| 4 下一步工作 | 第55-56页 |
| 小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
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