| 1 摘要 | 第1-15页 |
| ·中文摘要 | 第11-12页 |
| ·Abstract | 第12-15页 |
| 2 前言 | 第15-29页 |
| ·磷酸化作用对转录因子活性的调节 | 第15-16页 |
| ·蛋白激酶CK2概述 | 第16-22页 |
| ·蛋白激酶CK2的结构 | 第16-18页 |
| ·蛋白激酶CK2的表达和亚细胞定位 | 第18-19页 |
| ·蛋白激酶CK2的相互作用底物 | 第19-20页 |
| ·蛋白激酶CK2的功能 | 第20-21页 |
| ·蛋白激酶CK2的特异性抑制剂 | 第21-22页 |
| ·同源盒转录因子Pdx-1概述 | 第22-29页 |
| ·Pdx-1的结构 | 第22-23页 |
| ·Pdx-1的表达 | 第23-24页 |
| ·Pdx-1的亚细胞定位与转运 | 第24页 |
| ·Pdx-1的生理功能及作用机制 | 第24-27页 |
| ·Pdx-1的基因表达调控 | 第27-29页 |
| 3 材料与方法 | 第29-75页 |
| ·材料 | 第29-56页 |
| ·主要仪器、设备与耗材 | 第29-30页 |
| ·试剂盒 | 第30-31页 |
| ·放射化学试剂 | 第31页 |
| ·其他试剂 | 第31-33页 |
| ·所需溶液 | 第33-44页 |
| ·菌株和细胞系表 | 第44-45页 |
| ·质粒 | 第45-52页 |
| ·引物 | 第52-53页 |
| ·工具酶 | 第53页 |
| ·抗体 | 第53-55页 |
| ·电脑软件 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-75页 |
| ·表达载体的构建 | 第56-60页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第60-61页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及考马斯亮蓝染色 | 第61-63页 |
| ·蛋白质的Western分析 | 第63页 |
| ·细胞培养 | 第63-65页 |
| ·细胞转染 | 第65-66页 |
| ·细胞总蛋白的提取及细胞核蛋白/浆蛋白的分离 | 第66-67页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第67页 |
| ·免疫荧光实验 | 第67-68页 |
| ·Pdx-1与CK2之间的相互作用分析 | 第68-70页 |
| ·CK2磷酸化Pdx-1 | 第70-73页 |
| ·CK2激酶对Pdx-1转录活性的影响(luciferase assay) | 第73-74页 |
| ·蛋白质稳定性和降解实验 | 第74-75页 |
| 4 结果与分析 | 第75-104页 |
| ·融合蛋白质的表达与纯化 | 第75-80页 |
| ·GST-Pdx-1融合蛋白质的表达与纯化 | 第75-79页 |
| ·CK2全酶、CK2α、MBP-CK2α'、CK2β蛋白质的表达与纯化 | 第79-80页 |
| ·CK2激酶对Pdx-1蛋白磷酸化的研究 | 第80-88页 |
| ·CK2激酶体外磷酸化Pdx-1蛋白 | 第80-82页 |
| ·CK2磷酸化位点的分析 | 第82-87页 |
| ·CK2激酶体内磷酸化Pdx-1蛋白 | 第87-88页 |
| ·CK2激酶磷酸化对Pdx-1转录活性的影响 | 第88-90页 |
| ·CK2激酶磷酸化对Pdx-1蛋白稳定性的影响 | 第90-93页 |
| ·放线菌酮(CHX)处理实验结果 | 第91-92页 |
| ·MG132处理实验结果 | 第92-93页 |
| ·CK2激酶磷酸化对Pdx-1亚细胞定位的影响 | 第93-95页 |
| ·CK2激酶与Pdx-1蛋白的细胞内共定位研究 | 第95-98页 |
| ·共聚焦免疫荧光实验对CK2激酶和Pdx-1蛋白的细胞内共定位研究 | 第95-96页 |
| ·细胞核蛋白/浆蛋白的分离实验对共定位的研究 | 第96-98页 |
| ·Pdx-1与CK2蛋白质相互作用分析 | 第98-104页 |
| ·GST-pull down检测CK2全酶、CK2α、CK2β与Pdx-1的相互作用 | 第98-100页 |
| ·Far-western blot检测CK2α'与Pdx-1的相互作用 | 第100-102页 |
| ·免疫共沉淀(Co-IP)检测体内CK2与Pdx-1的相互作用 | 第102-104页 |
| 5 讨论 | 第104-109页 |
| 6 结论与展望 | 第109-111页 |
| 7 参考文献 | 第111-122页 |
| 攻读学位期间发表论文目录 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
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