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重组减毒沙门氏菌鸭瘟病毒DNA疫苗的构建及其口服免疫效果研究
 
     论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-12页
第一章 减毒沙门氏菌递送鸭瘟DNA疫苗的研究进展第12-24页
 1 减毒沙门氏菌用于DNA疫苗递送第12-14页
   ·沙门氏菌与宿主细胞的相互作用第12-13页
   ·减毒沙门氏菌作为疫苗载体第13页
   ·减毒沙门氏菌用于DNA疫苗递送的优势及研究进展第13-14页
 2 DNA疫苗的研究进展第14-20页
   ·DNA疫苗概述第15页
   ·增强DNA疫苗效力的方法第15-19页
   ·DNA疫苗口服免疫途径的应用第19-20页
 3 鸭瘟概述第20-22页
   ·鸭瘟概述第20页
   ·鸭瘟病毒免疫原性特征第20-21页
   ·鸭瘟病毒DNA疫苗的研究现状第21-22页
 4 选题目的和意义第22-24页
第二章 新颖通用型DNA疫苗载体的构建及其真核表达能力的研究第24-37页
 1 材料第24-25页
   ·主要质粒、菌株、细胞及试剂第24-25页
   ·主要的仪器设备第25页
 2 方法第25-29页
   ·单元基因引物设计第25-26页
   ·单元基因片段扩增第26-27页
   ·(1/2DTSⅡ+asd+CpG+pUC),(BGH late poly A+CpG+SV40 enhancer)和(CMVMCS+CpG+SV40late poly A+1/2DTSⅡ)模板片段的构建第27-28页
   ·类生物合成新颖通用型DNA疫苗载体pkDNA第28页
   ·pkDNA载体质粒的酶切及测序鉴定第28页
   ·pkDNA-egfp质粒的构建第28-29页
   ·荧光显微镜观察pkDNA-egfp质粒在COS-7中的表达第29页
 3 结果第29-34页
   ·单片段的PCR扩增结果第29-30页
   ·三模板片段的融合PCR结果第30-31页
   ·pkDNA质粒的合成及PCR鉴定第31页
   ·pkDNA测序结果第31-32页
   ·pkDNA-egfp质粒的构建第32-33页
   ·荧光显微镜观察pkDNA-egfp质粒在COS-7中的表达结果第33-34页
 4 讨论第34-36页
   ·平衡致死质粒宿主系统作为质粒筛选的优势第34页
   ·CpG基序作为DNA疫苗佐剂的优势第34-35页
   ·核靶向序列(nuclear targeting sequences,DTS)对抗原表达量的影响第35页
   ·多聚腺苷酸的作用第35页
   ·类生物合成法构建质粒的优势第35-36页
 5 小结第36-37页
第三章 鸭瘟DNA疫苗质粒的构建及体外表达能力检测第37-50页
 1 材料第37-38页
   ·质粒、病毒、菌株及细胞第37页
   ·主要试剂第37页
   ·主要的仪器设备第37-38页
 2 方法第38-42页
   ·抗原基因UL24、tgB(451-1670bp)及佐剂基因LTB、DuIL2的PCR扩增第38-39页
   ·重叠PCR构建UL24-LTB、UL24-DuIL2融合基因第39页
   ·单抗原基因及抗原与佐剂的融合基因酶切连接pkDNA疫苗载体及鉴定第39页
   ·tUL24蛋白及tgB截断蛋白的原核表达及纯化第39-40页
   ·兔抗tgB及tUL24截断蛋白血清的制备第40页
   ·鸭瘟DNA疫苗质粒的体外表达能力检测第40-42页
 3 结果第42-47页
   ·抗原基因UL24、tgB及佐剂基因LTB、Du1L2的PCR扩增结果第42页
   ·重叠PCR构建UL24-LTB和UL24-Du1L2融合基因结果第42-43页
   ·鸭瘟DNA疫苗的测序结果第43页
   ·截断蛋白tgB(451-1650bp)及tUL24(720-1230bp)的原核表达及纯化第43-45页
   ·琼脂糖扩散实验验证兔抗tgB和tUL24血清效价第45页
   ·间接免疫荧光检测鸭瘟DNA疫苗质粒在COS-7细胞中的表达结果第45-47页
   ·RT-PCR检测鸭瘟DNA疫苗质粒在COS-7细胞中的表达结果第47页
 4 讨论第47-48页
   ·外源囊膜糖蛋白对细菌生理特征的影响第47-48页
   ·从蛋白及基因水平来检测鸭瘟DNA疫苗在体外细胞内的表达第48页
 5 小结第48-50页
第四章 弱毒沙门氏菌c8276△crp/cya的构建及以此为基础的重组减毒沙门氏菌鸭瘟病毒DNA疫苗的构建及鉴定第50-60页
 1 材料第50-51页
   ·主要质粒、菌株及试剂第50页
   ·主要的仪器设备第50-51页
 2 方法第51-54页
   ·cya上下游基因的扩增第51页
   ·cya上下游同源臂的融合第51页
   ·cya上下游融合基因酶切连接pRE112质粒及鉴定第51-52页
   ·质粒pRE112-△cya转染供体菌株第52页
   ·在减毒鼠伤寒沙门氏菌c8276△crp基础上构建c8276△crp/cya第52页
   ·缺失株c8276△crp/cya的生化鉴定第52-53页
   ·鸭瘟DNA疫苗质粒电转c8276△crp/cya感受态第53页
   ·鸭瘟DNA疫苗质粒在c8276△crp/cya中的稳定性鉴定第53页
   ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌c8276△crp/cya鸭瘟DNA疫苗的安全性鉴定第53-54页
 3 结果第54-57页
   ·cya上下游基因的扩增及融合结果第54页
   ·pRE112-△cya质粒的鉴定第54-55页
   ·c8276△crp菌株与c7213(pRE112-△cy)结合单菌落PCR鉴定第55页
   ·c8276△crp/cya的鉴定第55-56页
   ·鸭瘟DNA疫苗质粒电转入c8276△crp/cya的PCR鉴定结果第56页
   ·鸭瘟DNA疫苗质粒在c8276△crp/cya中的稳定性鉴定结果第56页
   ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌c8276△crp/cya鸭瘟DNA疫苗的安全性鉴定结果第56-57页
 4 讨论第57-59页
   ·自杀质粒介导的同源重组方法构建突变株第57页
   ·鼠伤寒沙门氏菌△crp/cya双缺失株作为疫苗载体的应用第57-58页
   ·pkDNA质粒对c8276△crp/cya的生理特性的影响第58页
   ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌c8276△crp/cya鸭瘟DNA疫苗的稳定性及安全性评价的意思第58-59页
 5 小结第59-60页
第五章 麻鸭口服免疫重组c8276△crp/cya DEV-DNA疫苗的免疫效果研究第60-74页
 1 材料第60-61页
   ·实验动物第60页
   ·菌株及病毒第60页
   ·主要试剂及配制第60页
   ·主要的仪器设备第60-61页
 2 方法第61-62页
   ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌c8276△crp/cya鸭瘟DNA疫苗口服剂量的确定第61页
   ·动物免疫及样品采集第61页
   ·差速离心配合蔗糖垫底的方法纯化DEV病毒颗粒第61页
   ·包被抗原及阳性样品最佳稀释度的确定第61-62页
   ·ELISA检测特异性抗tUL24蛋白及DEV的抗体水平应答第62页
   ·攻毒保护试验第62页
 3 结果第62-69页
   ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌c8276△crp/cya鸭瘟DNA疫苗的口服免疫第62-63页
   ·鸭瘟病毒的细胞培养及纯化第63-64页
   ·最佳抗原及最佳样品稀释度的确定第64-65页
   ·间接ELISA检测血清抗tUL24蛋白和DEV的IgY滴度第65-66页
   ·间接ELISA检测胆汁中抗tUL24蛋白和DEV的IgA滴度第66-69页
 4 讨论第69-72页
   ·检测特异性IgY和IgA抗体的意义第69页
   ·佐剂及多抗原基因同时免疫对鸭瘟DNA疫苗体液免疫的影响第69-70页
   ·质粒载体对鸭瘟DNA疫苗体液免疫的影响第70-71页
   ·LTB作为黏膜佐剂在促进口服鸭瘟DNA疫苗免疫效果上的优势第71-72页
   ·多抗原基因共免疫在诱导保护力上的优势第72页
 5 小结第72-74页
参考文献第74-84页
附录 PKDNA全序列第84-86页
致谢第86页

 
 
论文编号BS2431363,这篇论文共86
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