目录 | 第1-6页 |
缩略词表 | 第6-8页 |
摘要 | 第8-9页 |
Summary | 第9-11页 |
前言 | 第11-13页 |
第一章 金黄色葡萄球菌快速检测方法及研究进展 | 第13-22页 |
1 培养基法 | 第13-14页 |
2 免疫学方法 | 第14-16页 |
·乳胶凝集试验 | 第14-15页 |
·酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA) | 第15-16页 |
·放射免疫分析法(Radioimmuno Assay,RIA) | 第16页 |
3 分子生物学方法 | 第16-19页 |
·聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR) | 第17页 |
·实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-Time Fluorescent Quantitative PCR, FQ-PCR) | 第17-18页 |
·基因芯片技术(gene chip ,DNA chip) | 第18-19页 |
4 其他检测方法 | 第19-20页 |
·表面等离子共振技术 | 第19-20页 |
·免疫传感器技术 | 第20页 |
5 金黄色葡萄球菌检测发展方向及其应用展望 | 第20-22页 |
第二章 金黄色葡萄球菌蛋白 A 抗原的提取及特异性鉴定 | 第22-30页 |
1 材料及试剂 | 第22-23页 |
·菌种 | 第22页 |
·主要生化试剂 | 第22页 |
·仪器设备 | 第22页 |
·试剂配制 | 第22-23页 |
·改良肉汤培养基 | 第22页 |
·SDS-PAGE 电泳所需试剂 | 第22-23页 |
·ELISA 检测所需试剂 | 第23页 |
2 方法 | 第23-25页 |
·金黄色葡萄球菌的培养 | 第23-24页 |
·SPA 粗提 | 第24页 |
·纯化 | 第24-25页 |
·分离纯化 SPA | 第24页 |
·选择收集 SPA | 第24-25页 |
·纯度及相对分子量检测 | 第25页 |
3 结果 | 第25-27页 |
·金黄色葡萄球菌的培养 | 第25页 |
·SPA 的提取和纯化 | 第25-27页 |
·SPA 特异性检测 | 第27页 |
·纯度及相对分子量检测 | 第27页 |
4 讨论 | 第27-29页 |
5 结论 | 第29-30页 |
第三章 金黄色葡萄球菌蛋白 A 单克隆抗体的制备 | 第30-42页 |
1 材料及试剂 | 第30-32页 |
·菌株、筛选抗原、细胞及实验动物 | 第30页 |
·主要仪器设备 | 第30页 |
·主要试剂 | 第30页 |
·试剂配制 | 第30-32页 |
·细胞培养所需试剂 | 第30-31页 |
·染色体计数所需试剂 | 第31-32页 |
2 方法 | 第32-35页 |
·动物免疫 | 第32页 |
·细胞融合与杂交瘤细胞筛选 | 第32-34页 |
·饲养细胞的制备 | 第32页 |
·脾细胞的制备 | 第32页 |
·细胞融合 | 第32-33页 |
·杂交瘤细胞的筛选及亚克隆 | 第33页 |
·杂交瘤细胞的扩大培养及冻存 | 第33页 |
·单克隆抗体 Ig 亚类的鉴定 | 第33页 |
·抗原位点分析 | 第33-34页 |
·腹水的制备与单克隆抗体的纯化 | 第34页 |
·单克隆抗体特异性鉴定 | 第34页 |
·单克隆抗体的稳定性鉴定 | 第34-35页 |
·细胞体外传代试验 | 第34页 |
·连续冻存复苏试验 | 第34-35页 |
·腹水连续传代试验 | 第35页 |
·杂交瘤细胞染色体数目鉴定 | 第35页 |
3 结果 | 第35-40页 |
·杂交瘤细胞株的建立与单抗 Ig 亚类鉴定 | 第35-36页 |
·单克隆抗体抗原位点分析 | 第36页 |
·单克隆抗体的纯化 | 第36-38页 |
·单克隆抗体的稳定性测定 | 第38-39页 |
·杂交瘤细胞染色体数目鉴定 | 第39-40页 |
4 讨论 | 第40-41页 |
5 结论 | 第41-42页 |
第四章 金黄色葡萄球菌双抗夹心 ELISA 检测方法的建立 | 第42-48页 |
1 材料及试剂 | 第42-43页 |
·菌株、单克隆抗体 | 第42页 |
·主要仪器设备 | 第42页 |
·主要试剂及配制 | 第42-43页 |
2 方法 | 第43-44页 |
·单克隆抗体的浓缩 | 第43页 |
·酶标抗体的制备 | 第43页 |
·ELISA 方法检测酶标抗体 3B11-HRP 活性 | 第43-44页 |
·双抗夹心 ELISA 建立 | 第44页 |
·捕获抗体包被浓度及酶标抗体工作浓度的确定 | 第44页 |
·双抗体夹心 ELISA 检测方法特异性及灵敏度的测定 | 第44页 |
3 结果 | 第44-46页 |
·酶标抗体 3B11-HRP 活性 | 第44-45页 |
·抗体包被浓度及酶标抗体工作浓度的确定 | 第45-46页 |
·双抗体夹心 ELISA 的特异性 | 第46页 |
4 讨论 | 第46-47页 |
5 结论 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-55页 |
致谢 | 第55-56页 |
作者简介 | 第56-57页 |
导师简介 | 第57-58页 |