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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--杀鱼爱德华氏菌1,6-二磷酸果糖醛缩酶的免疫原性及分泌调控
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杀鱼爱德华氏菌1,6-二磷酸果糖醛缩酶的免疫原性及分泌调控
 
     论文目录
 
摘要第5-7页
Abstract第7-9页
第1章 文献综述第13-24页
    1.1 水产养殖业病害发生及疫苗第13-14页
    1.2 糖酵解途径的持家酶第14-17页
        1.2.1 1,6-二磷酸果糖醛缩酶第14-15页
        1.2.2 其他糖酵解持家酶第15页
        1.2.3 持家酶的分泌第15-17页
    1.3 杀鱼爱德华氏菌及致病机制第17页
    1.4 革兰氏阴性菌的分泌系统第17-23页
        1.4.1 两步分泌途径第18-21页
        1.4.2 一步分泌途径第21-22页
        1.4.3 其他分泌系统第22-23页
    1.5 本研究主要内容和意义第23-24页
第2章 FBA作为广谱型亚单位疫苗的免疫原性第24-47页
    2.1 前言第24页
    2.2 实验材料第24-26页
        2.2.1 实验试剂与材料第24页
        2.2.2 菌株、质粒载体与引物第24页
        2.2.3 细菌及实验动物斑马鱼与大菱鲆第24-26页
    2.3 实验方法第26-33页
        2.3.1 五种海洋病原菌fba基因的克隆、表达和蛋白纯化第27-28页
        2.3.2 FBA蛋白的鉴定第28-30页
        2.3.3 多克隆抗体的制备第30页
        2.3.4 五种海洋病原菌胞外蛋白、周质空间蛋白及外膜蛋白的提取第30-31页
        2.3.5 对斑马鱼的免疫与攻毒第31-32页
        2.3.6 对大菱鲆的免疫与攻毒第32页
        2.3.7 免疫后大菱鲆血清针对免疫原FBA蛋白的特异性分析第32页
        2.3.8 免疫后大菱鲆血清针对五种病原菌的特异性分析第32-33页
        2.3.9 血清杀菌活力测定第33页
        2.3.10 斑马鱼脾脏及肾脏组织RNA提取及逆转录第33页
        2.3.11 免疫因子表达水平的分析第33页
    2.4 实验结果第33-45页
        2.4.1 FBA在不同病原菌的序列对比分析第33-34页
        2.4.2 多克隆抗体的特异性及灵敏度第34-36页
        2.4.3 五种海洋病原菌FBA的非胞内定位第36-37页
        2.4.4 FBA的免疫保护效力第37-38页
        2.4.5 FBA免疫大菱鲆后的体液免疫效果第38-41页
        2.4.6 经FBA免疫后免疫相关基因的转录水平差异第41-45页
    2.5 讨论第45页
    2.6 本章小结第45-47页
第3章 杀鱼爱德华氏菌FBA的分泌途径第47-66页
    3.1 前言第47页
    3.2 实验材料第47页
    3.3 实验方法第47-54页
        3.3.1 胞外蛋白的提取第47-49页
        3.3.2 外膜小泡的样品制备第49页
        3.3.3 Sec途径缺失株的构建第49-51页
        3.3.4 带有His标签的FBA表达菌株构建和验证第51-53页
        3.3.5 SecB与FBA相互作用的测定第53页
        3.3.6 胞外蛋白的检测第53-54页
    3.4 实验结果第54-64页
        3.4.1 经典分泌途径与FBA分泌相关性第54-57页
        3.4.2 FBA分泌相关蛋白第57-60页
        3.4.3 FBA分泌相关基因第60-64页
    3.5 讨论第64-65页
    3.6 本章小结第65-66页
第4章 杀鱼爱德华氏菌FBA的分泌调控第66-91页
    4.1 前言第66页
    4.2 实验材料第66页
    4.3 实验方法第66-71页
        4.3.1 FBA分泌水平分析第66-68页
        4.3.2 构建用于分析FBA潜在信号肽的菌株第68-69页
        4.3.3 RNA的抽提和逆转录及RT-qPCR第69页
        4.3.4 内参基因分析软件BestKeeper、GeNorm和Normfinder第69页
        4.3.5 Chip-seq实验第69-71页
    4.4 实验结果第71-88页
        4.4.1 FBA在不同条件下的分泌水平第71-74页
        4.4.2 FBA的分泌不需要信号肽第74页
        4.4.3 缺失株EIB202/△esrA和EIB202/△esrC的FBA分泌水平第74-76页
        4.4.4 esrC调控的下游基因第76页
        4.4.5 菌体生长不同阶段fba基因的转录水平第76-88页
    4.5 讨论第88-90页
    4.6 本章小结第90-91页
第5章 杀鱼爱德华氏菌胞外FBA的功能第91-100页
    5.1 前言第91页
    5.2 实验材料第91页
    5.3 实验方法第91-94页
        5.3.1 FBA酶活分析第91-92页
        5.3.2 非变性Western-blot第92页
        5.3.3 毒力不同的E.piscicida菌株FBA分泌量相对定量分析第92-93页
        5.3.4 细胞侵染第93-94页
    5.4 实验结果第94-98页
        5.4.1 非胞内FBA酶活第94-96页
        5.4.2 分泌到胞外的FBA的结构第96页
        5.4.3 FBA分泌量与病原菌毒力相关性第96-97页
        5.4.4 FBA在病原菌侵染细胞过程中的黏附作用第97-98页
    5.5 讨论第98-99页
    5.6 本章小结第99-100页
第6章 结论和创新点第100-102页
    6.1 主要结论第100-101页
    6.2 论文创新点第101页
    6.3 展望第101-102页
参考文献第102-112页
攻读博士学位期间研究成果第112-113页
致谢第113-114页
附录1 E.piscicida EIB202/△P插入失活突变株文库第114-135页
附录2 突变体文库筛选FBA分泌相关基因的ELISA结果第135-164页

 
 
论文编号BS2477614,这篇论文共164
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