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MicroFast?金葡肠毒素快速检测卡让5种肠毒素无处匿身

【西医学检验论文】本着“良心事业,润泽民生”的宗旨和“以技术为引领,以人才为依托,专注食品安全,打造健康生活”的理念,北京良润生物科技有限公司(以下简称“良润生物”)一直致力于提升微生物快速检测技术,研发多种优质产品。近日,良润生物推出了检测金黄色葡萄球菌肠毒素(简

本着“良心事业,润泽民生”的宗旨和“以技术为引领,以人才为依托,专注食品安全,打造健康生活”的理念,北京良润生物科技有限公司(以下简称“良润生物”)一直致力于提升微生物快速检测技术,研发多种优质产品。近日,良润生物推出了检测金黄色葡萄球菌肠毒素(简称“金葡肠毒素”)的新品――MicroFast?金葡肠毒素快速检测卡,―款能够检测出5种肠毒素SEA/SEB/SEC/SED/SEE的国际领先产品,新产品的检测原理是怎样的?与传统方法相比有哪些优势?带着众多疑问,本刊记者采访了北京良润生物科技有限公司总经理刘磊先生。
网 /6/view-11642213.htm
记者:金葡肠毒素引起的食物中毒是一个世界性难题,能否介绍下该毒素的危害有哪些?主要存在于哪些食品中?
刘磊:金葡肠毒素是金黄色葡萄球菌分泌的一种具有超抗原活性的细菌毒素,易溶于水和盐溶液,对热很稳定,在100℃条件下煮沸30min仍具有致病性,而且能够抵抗胃肠液中蛋白酶的水解作用。依据肠毒素抗原性和等电点的不同,至今为止已发现金葡菌可产生A、B、C、D、E、F等多种肠毒素,其中以A型毒力最强,也最为常见约占75%,摄入1μg即能引起中毒。食物在受到金黄色葡萄球菌污染,并且菌落总数在达到一定数量之后,在20~30℃条件下经2~4小时的繁殖就有可能产生金葡肠毒素,进食带有此毒素的食物1~5小时后,会出现急性胃肠炎的症状,其表现为恶心、呕吐和腹泻等,对于小孩、孕妇等体质相对比较弱的人群症状比较明显。虽然金黄色葡萄球菌在100℃下加热30min会被杀死,但金葡肠毒素却不会,它非常稳定,有时可能金黄色葡萄球菌没有了但其肠毒素依然存在。金黄色葡萄球菌肠毒素的产生需要满足两个条件,首先只有高蛋白食物才会容易产生;其次,金黄色葡萄球菌达到一定的数量一般为103以上才可能产生毒素。所以像奶及奶制品、肉及肉制品中都容易产生金黄色葡萄球菌肠毒素。
记者:传统检测金葡肠毒素的方法有哪些?
刘磊:在食品卫生检验工作中,有多种检测金葡肠毒素的方法,最经典是动物学试验,一般是对幼猫或幼猴腹腔注射或喂食肉汤培养物或呕吐物,然后观察其可能出现的异常生理和形态变化,一般在4h内发生呕吐、腹泻和体温升高或死亡等现象,就表示有金葡肠毒素存在。该方法使用较早但容易出现假阳性现象,因此受到极大限制。免疫法也是较为常见的手段,如国外的酶联免疫试剂盒、96孔板等,但是这些方法的样品前处理过程比较繁琐,消耗时间长,整个检测过程就需要1.5小时以上的时间才能完成,极大地影响了时效性。
记者:据了解,贵公司最近针对金葡萄肠毒素的检测研发出了一种快检产品――Microfast?金葡肠毒素快速检测卡,该检测卡的原理是什么?与传统方法相比有哪些优势?
刘磊:Microfast?金葡肠毒素快速检测卡应用“双抗体夹心法”的原理,纳米金颗粒作为标记指示物,将一种抗体固定到NC膜上T线处,另外一种抗体标记了纳米金颗粒。样品中若有金葡肠毒素,就会与纳米金颗粒标记的特异性单克隆抗体结合,并且同预包被于NC膜T线上的抗体结合,如此一来,就会形成一个“三明治”结构的结合,检测卡显示明显的红线,证明其结果为阳性;样品中若没有金葡肠毒素,金颗粒则不会聚集,检测卡也不会出现红线。通过肉眼直接观察T线处是否变红,便可判断样品中是否含有金黄色葡萄球菌,其检测灵敏度低至1ppb。
酶联免疫试剂盒与此原理相同,只是将胶体金换成酶,酶可以催化“三明治”结构的底物显色。而酶联免疫法要经过加样品、洗脱、加酶、再次洗脱、显色等程序,因此操作步骤更多。相比而言,快速检测卡操作简单,耗时短,基本上是一步操作即可,所有的实验在保证结果的情况下,步骤越少,效率越高。
国标规定某些食品中的致病菌不得检出或限量检出,但此限量值非常低。以沙门氏菌为例,假设其在某类食品中限量值为0.04cfu/g,但检测方法灵敏度一般是103~104cfu/g,也就是说,当菌落数达到103~104cfu/g该检测方法才能够检出,并得到比较稳定的结果。限量值与检测方法产生了矛盾,二者有100万的差距,此时就要对目标菌通过增菌的方法来弥补灵敏度的不足,让如此少的菌数扩增变多之后,再进行检测,这种方法可以间接地判断细菌危害。相较细菌检测而言,检测细菌毒素则更为快速直接,毒素是细菌危害中较为严重的一种,很多群体性的食品安全事件都由细菌毒素所引起。如某地方发生食物中毒,检测部门可以带着某毒素快速检测卡到达现场,通过采集呕吐物后使用检测卡检测的方式来判断中毒事件是否由这类细菌所引起。而Microfast?金葡肠毒素快速检测卡适用于产品原材料部门、产品监控部门、疾控部门等。
总体而言,Microfast?金葡肠毒素快速检测卡的优势有6点,一是时间短,使用方便快速,便于基层使用和现场使用,所有反应能在15分钟内完成;二是成本相对比较低,不需要特殊的仪器设备;三是该方法应用范围广,可适应多种检测条件;四是该方法准确,假阳性率低;五是该方法标记物稳定,标记样品在4℃贮存1年以上,无信号衰减现象;六是该方法胶体金本身为红色,不需要加入发色试剂,省却了酶标的致癌性底物及终止液的步骤,对人体无毒害。
记者:MicroFast?金葡肠毒素快速检测卡的准确性是如何保证的?
刘磊:首先,是对标准物质进行检测,我们有非常多的金黄色葡萄球菌菌珠,并对它们进行产毒培养,然后进行相应的鉴定,从菌种里筛选出可以产生肠毒素的菌株,再通过我们的检测卡测试,也检测出了产生肠毒素的菌株,与鉴定结果是一致的。其次,我们跟国外同类作用的检测盒进行了对比,以保证准确性。另外,我们也和国乳中心进行积极的沟通,让他们对我们的产品进行更系统详细地评定。
记者:近期成立的中国食源性微生物检测技术创新战略联盟中,贵公司成为第一届理事会成员单位,您能否介绍下该联盟成立的目的是什么吗?
刘磊:该战略联盟由军事医学科学院微生物流行病研究所研究员杨瑞馥教授担任理事长,国家食品安全风险评估中心研究员刘秀梅教授担任名誉理事长,连同检测行业资深专家创办的一个相对松散的学术性质组织,其宗旨是推动国内对微生物和检测的重视。联盟会对相关企业或用户做一些微生物检测方面的培训,给他们解释一些在微生物检测中较常见的关键问题。另外,国内微生物检测尤其是快检领域目前实力依然较为薄弱,该组织定期有成员之间的交流活动,并且很多资深专家也会对联盟之内的企业进行技术性的指导,促进国内企业快检领域的发展。
记者:目前贵公司有哪些用于微生物检测的产品?可以检测哪些项目?
刘磊:良润生物专注于食品中微生物快速检测的研究,目前有4个产品系列,第一个是致病菌快速增菌培养基,目的是让致病菌快速生长,缩短增菌时间,可大大缩短整个检测过程的时间。以沙门氏菌为例,目前我们在24小时内就可以得到阴性/阳性结果,比其他方法至少要缩短一天。第二是致病菌快速检测卡,就是用免疫的方法来检测致病菌。第三是微生物测试片,细菌在生长代谢的过程中,有一些酶参与,这些酶有可能是共性的也有可能是特异性的,对于共性酶,则检测含有这些酶的菌落总数,对于特异性酶,只有一类细菌含有此酶,通过检测该酶的存在即可判断是否有该类细菌。第四个产品系列是细菌毒素系列,金葡肠毒素产品是该系列的第一个产品。良润生物产品系列为数不多,但我们专注于把每个产品做精做细,并通过持续地不断地改进,使每一个产品都有其独特的价值。

 
 
 
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