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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--蚓激酶山羊乳腺生物反应器研究及其表达
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蚓激酶山羊乳腺生物反应器研究及其表达
 
     论文目录
 
摘要第1-10页
Abstract第10-13页
前言第13-18页
第一部分 蚓激酶乳腺组织特异性表达载体的构建及其在山羊奶中的暂时表达第18-33页
 1 材料与方法第18-25页
   ·菌种及质粒第18页
   ·限制性内切酶和工具酶第18页
   ·主要生化试剂第18-19页
   ·主要仪器第19页
   ·实验动物第19页
   ·培养基的配制第19页
   ·主要试剂的配制第19-20页
   ·DNA目的片段的回收第20-21页
   ·DNA片段的连接第21页
   ·感受态菌的制备(CaCl_2转化法)第21-22页
   ·连接物的转化第22页
   ·转化菌落的快速鉴定第22页
   ·质粒DNA的提取与纯化第22-23页
   ·质粒的酶切第23-24页
   ·质粒DNA的定量第24页
   ·真核表达载体pIRES-bCP的构建第24页
   ·真核表达质粒pIbCP-LK-neo的构建第24页
   ·真核表达质粒pIbCP-LK-LK的构建第24-25页
   ·SDS碱裂解法大提质粒pIbCP-LK-neo及pIbCP-LK-LK第25页
   ·转染第25页
   ·溶圈实验第25页
   ·SDS-PAGE凝胶电泳第25页
 2 结果第25-31页
   ·构建出乳腺组织特异性表达载体pIRES-bCP第25页
   ·构建出含单个蚓激酶基因的真核表达质粒pIbCP-LK-neo第25页
   ·构建出含双蚓激酶基因的真核表达质粒pIbCP-LK-LK第25-29页
   ·表达检测第29-31页
 3 讨论第31-33页
第二部分 蚓激酶基因在Vero细胞及DK细胞上的表达第33-43页
 1 材料与方法第33-38页
   ·质粒与菌株第33页
   ·限制性内切酶和工具酶第33页
   ·主要生化试剂第33页
   ·主要仪器第33页
   ·培养基的配制第33页
     ·LB液体、固体培养基的配制同实验一第33页
     ·MEM细胞培养基的配制第33页
   ·主要试剂的配制第33-34页
   ·DNA的常规操作第34页
   ·pILK质粒的构建第34-37页
   ·pILK质粒的大量制备第37页
   ·Vero-dhfr~-细胞及DK-dhfr~-细胞的培养第37页
   ·细胞的传代第37页
   ·细胞计数第37页
   ·Vero-dhfr~-细胞及DK-dhfr~-细胞对G418耐受浓度的测定第37页
   ·外源基因转染真核细胞(脂质体介导法)第37-38页
   ·pILK基因在Vero-dhfr~-细胞及DK-dhfr~-细胞中的暂时表达第38页
 2 结果第38-40页
   ·pILK真核表达质粒的构建第38页
   ·Vero-dhfr~-胞及Dx-dhfr~-细胞对G418耐受试验第38页
   ·pILK在真核细胞中的暂时表达第38页
   ·细胞克隆筛选结果第38-40页
 3 讨论第40-43页
第三部分 PA317-pLNbLK细胞株的建立及蚓激酶逆转录病毒转染山羊乳腺第43-53页
 1 材料与方法第43-47页
   ·质粒、菌株、细胞与实验动物第43页
   ·限制性内切酶和工具酶第43页
   ·主要生化试剂第43页
   ·主要仪器第43页
   ·逆转录病毒载体pLNbLK第43-45页
   ·培养基的配制第45页
   ·主要试剂的配制第45页
   ·DNA提取缓冲液第45页
   ·细胞的培养第45页
   ·细胞的传代及计数第45页
   ·PA317细胞及NIH3T3细胞对G418耐受浓度的测定第45页
   ·pLNbLK反转录病毒表达质粒转染PA317细胞(脂质体介导法)第45-46页
   ·RT-PCR引物设计第46页
   ·真核细胞基因组的提取第46页
   ·用PCR方法检测PA317-LK细胞第46页
   ·病毒滴度的测定第46-47页
   ·转染及检测第47页
 2 结果第47-51页
   ·PA317细胞及NIH3F3细胞对G418耐受浓度第47页
   ·pLNbLK反转录病毒表达质粒转染PA317细胞结果第47-49页
   ·PA317-LK细胞基因组PCR结果第49页
   ·病毒滴度的测定结果第49页
   ·转染后检测结果第49-51页
 3 讨论第51-53页
结论第53-54页
参考文献第54-58页
附录第58-59页
致谢第59页

 
 
论文编号BS976315,这篇论文共59
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