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产核黄素Bacillus subtilis中心代谢途径代谢工程和比较基因组学
 
     论文目录
 
摘要第1-4页
ABSTRACT第4-10页
第一章 文献综述第10-42页
   ·核黄素的发现、理化性质、功能、用途和生产工艺第10-12页
   ·B.subtilis 核黄素合成途径及其代谢调节机制第12-19页
     ·核黄素的合成途径第12-14页
     ·核黄素的操纵子结构第14-16页
     ·核黄素合成过程的代谢调节机制第16-19页
   ·产核黄素B.subtilis 工程菌的代谢工程策略第19-26页
     ·基于诱变和基因组重排技术的菌株构建第19-20页
     ·基于代谢网络模型的代谢工程策略第20-22页
     ·基于过表达核黄素操纵子的代谢工程策略第22-23页
     ·基于代谢通量调节的代谢工程策略第23-25页
     ·基于能量代谢机制的代谢工程策略第25-26页
   ·微生物代谢组学的研究进展及其在代谢工程中应用第26-33页
     ·微生物代谢组学的研究方法第27页
     ·微生物代谢组学的分析平台第27-29页
     ·数据挖掘第29-31页
     ·微生物代谢组学与代谢工程第31-33页
   ·高通量基因组测序系统的研究进展第33-39页
     ·第二代测序技术的发展现状第33-36页
     ·第三代测序技术第36-37页
     ·高通量测序技术的应用第37-39页
   ·本文的主要技术路线第39-42页
     ·选题背景第39-40页
     ·研究内容和技术路线第40-42页
第二章 产核黄素枯草芽孢杆菌戊糖磷酸途径的代谢工程第42-75页
   ·实验材料第44-49页
     ·菌种和质粒第44-45页
     ·培养基第45页
     ·主要仪器第45-46页
     ·主要试剂第46-47页
     ·主要溶液第47-49页
   ·实验方法第49-60页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第49页
     ·大肠杆菌质粒DNA 的提取第49-50页
     ·DNA 片段的回收和纯化第50-51页
     ·酶切体系第51页
     ·去磷酸化体系第51页
     ·内切酶和去磷酸化酶的失活第51-52页
     ·连接体系第52页
     ·琼脂糖凝胶电泳第52-53页
     ·基因定点突变第53-54页
     ·枯草芽孢杆菌的Spizizen 转化第54页
     ·枯草芽孢杆菌基因组DNA 的提取第54-55页
     ·菌体生长特性的考察和摇瓶发酵条件第55页
     ·发酵液中核黄素和残糖的测定第55-56页
     ·蛋白质含量的测定第56-57页
     ·生物量的测定第57-58页
     ·G6PD 和6PGD 酶活的测定第58页
     ·微生物胞内代谢物谱分析第58-59页
     ·发酵罐发酵第59-60页
     ·引物的设计和基因测序第60页
   ·结果与分析第60-74页
     ·zwf 基因和gnd 基因的定点突变第60-63页
     ·gnd361 突变基因表达载体的构建第63-65页
     ·zwf243 突变基因表达载体的构建第65-69页
     ·突变基因表达工程菌的构建第69页
     ·In vitro G6PD 和6PGD 酶活分析第69-70页
     ·工程菌株生长和核黄素发酵表征第70-72页
     ·胞内代谢物谱分析第72-73页
     ·工程菌株发酵罐发酵表征第73-74页
   ·小结第74-75页
第三章 产核黄素枯草芽孢杆菌糖异生途径的代谢工程第75-94页
   ·实验材料第78-79页
     ·菌株和质粒第78-79页
     ·实验试剂和溶液第79页
     ·实验仪器第79页
     ·培养基第79页
   ·实验方法第79页
   ·结果与分析第79-93页
     ·fbp 基因表达载体的构建第80-82页
     ·pckA 基因表达载体的构建第82-84页
     ·gapB 基因表达载体的构建第84-86页
     ·糖异生途径关键酶基因共表达载体的构建第86-88页
     ·过表达糖异生途径关键酶基因工程菌株的构建第88-91页
     ·工程菌生长和核黄素摇瓶发酵表征第91-93页
   ·小结第93-94页
第四章 产核黄素枯草芽孢杆菌的基因组测序第94-123页
   ·实验材料第96-97页
     ·菌株第96页
     ·实验试剂第96-97页
     ·实验仪器第97页
   ·实验方法第97-108页
     ·基因组DNA 的提取第97页
     ·基因组DNA 的定量分析第97-99页
     ·基因组DNA 文库的制备第99-102页
     ·GS FLX Titanium 微乳液聚合酶链式反应(emPCR)第102-103页
     ·磁珠的回收第103页
     ·DNA 文库的回收和富集第103-105页
     ·GS FLX Titanium 测序第105页
     ·文库回收和样品质量评价方法第105-108页
     ·基因组缺口(gap)区域的拼接第108页
   ·结果与分析第108-122页
     ·测序过程的质量控制第108-115页
     ·测序结果第115-117页
     ·焦磷酸测序的组装第117页
     ·缺口(gap)区域的拼接第117-119页
     ·基因组大片段缺失区域的基因及其产物分析第119-121页
     ·全基因组组装第121-122页
   ·小结第122-123页
第五章 产核黄素枯草芽孢杆菌的比较基因组学分析第123-158页
   ·实验材料第126-127页
     ·生物信息学软件第126页
     ·菌株和质粒第126-127页
     ·实验仪器第127页
     ·实验试剂第127页
     ·培养基第127页
   ·实验方法第127-131页
     ·mRNA 的提取第127-128页
     ·RealTime-PCR(RT-PCR)第128-129页
     ·融合PCR (Fusion PCR)第129-131页
     ·基因克隆第131页
   ·结果与分析第131-157页
     ·基于焦磷酸测序的突变分析第131-135页
     ·基于全基因组的突变分析第135-136页
     ·突变基因的注释与分类第136-137页
     ·Non-ORF 区域的突变分析第137-138页
     ·部分突变基因密码子偏爱性分析第138-140页
     ·芳香族氨基酸对测序菌株生长和核黄素合成的影响第140-141页
     ·枯草芽孢杆菌高效菌株重构系统的建立第141-152页
     ·菌株重构系统的应用第152-157页
   ·本章 小结第157-158页
第六章 结论与展望第158-161页
   ·主要结论第158-159页
   ·创新点第159-160页
   ·展望第160-161页
参考文献第161-174页
发表论文和科研情况第174-175页
附录第175-177页
致谢第177页

 
 
论文编号BS2316,这篇论文共177
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