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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--Plesiomonas sp.M6来源的甲基对硫磷水解酶MPH在毕赤酵母中的表达及其固定化研究
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Plesiomonas sp.M6来源的甲基对硫磷水解酶MPH在毕赤酵母中的表达及其固定化研究
 
     论文目录
 
摘要第5-7页
Abstract第7-9页
主要符号表第14-15页
第一部分 文献综述第15-26页
    1.1 有机磷水解酶研究进展第15-17页
        1.2.1 有机磷水解酶的研究概况第15-16页
        1.2.2 有机磷水解酶的来源及分布第16页
        1.2.3 甲基对硫磷水解酶的作用机理第16-17页
    1.2 巴斯德毕赤酵母表达系统第17-22页
        1.3.1 巴斯德毕赤酵母表达系统的特点第17-19页
        1.3.2 毕赤酵母表达载体和菌株第19-20页
        1.3.3 提高外源蛋白表达量优化策略第20-22页
    1.3 酶的固定化方法第22-24页
        1.3.0 固定化酶的应用第22-23页
        1.3.1 固定化酶的特点第23-24页
        1.3.2 固定化载体的选择第24页
    1.4 本文的研究目的及意义第24-26页
第二部分 材料与方法第26-47页
    2.1 材料第26-33页
        2.1.1 菌株第26页
        2.1.2 培养基第26-27页
        2.1.3 实验试剂第27-28页
        2.1.4 仪器及相关设备第28-29页
        2.1.5 实验室主要溶液成分及配制方法第29-30页
        2.1.6 PCR引物第30-33页
    2.2 实验方法第33-47页
        2.2.1 mph-R基因设计及全基因合成第33-35页
        2.2.2 PCR产物纯化回收第35页
        2.2.3 酶切处理pHBM905BDM载体第35-36页
        2.2.4 T4 DNA聚合酶作削Overlapping PCR产物第36页
        2.2.5 SDS碱裂解法提取质粒DNA第36-37页
        2.2.6 大肠杆菌XL10-Gold感受态的制备及其转化方法第37-38页
        2.2.7 毕赤酵母GS115感受态的制备及其转化方法第38页
        2.2.8 毕赤酵母细胞快速提取基因组的方法第38-39页
        2.2.9 构建重组表达载体pHBM905BDM-mph-R第39-40页
        2.2.10 甲基对硫磷MPH-R在毕赤酵母GS115中的鉴定和表达第40页
        2.2.11 Bradford法测定蛋白浓度第40-41页
        2.2.12 蛋白质纯化步骤第41-42页
        2.2.13 MPH-R酶活检测及酶学性质分析第42-44页
        2.2.14 MPH-R在发酵罐中的表达第44页
        2.2.15 壳聚糖固定化MPH-R第44-47页
第三部分 结果与分析第47-64页
    3.1 甲基对硫磷水解酶mph-R全基因合成第47-49页
        3.1.1 在线软件分析原始mph信号肽序列第47页
        3.1.2 优化序列与原始序列同源性对比第47-49页
        3.1.3 mph-R全基因合成第49页
    3.2 重组表达载体pHBM905BDM-mph-R的构建第49-50页
    3.3 有机磷水解酶在毕赤酵母中的表达和鉴定第50-51页
    3.4 重组甲基对硫磷水解酶MPH-R酶学性质分析第51-57页
        3.4.1 温度对MPH-R酶活的影响第51-53页
        3.4.2 pH对MPH-R酶活的影响第53-54页
        3.4.3 不同金属离子对MPH-R酶活的影响第54-55页
        3.4.4 MPH-R的糖基化分析第55-57页
    3.5 MPH-R在发酵罐中的表达第57-59页
    3.6 壳聚糖固定化MPH-R第59-64页
        3.6.1 固定化MPH-R蛋白质含量的测定第59页
        3.6.2 温度对固定化MPH-R酶活的影响第59-60页
        3.6.3 固定化MPH-R的热稳定性第60-61页
        3.6.4 pH对固定化MPH-R酶活的影响第61页
        3.6.5 固定化MPH-R的pH稳定性第61-62页
        3.6.6 固定化MPH-R的重复使用率第62-64页
第四部分 讨论与展望第64-67页
    4.1 讨论第64-65页
        4.1.1 甲基对硫磷水解酶MPH-R在毕赤酵母中的表达第64-65页
        4.1.2 壳聚糖固定化MPH-R的理化性质研究第65页
    4.2 展望第65-67页
结论第67-68页
参考文献第68-74页
致谢第74页

 
 
论文编号BS3162618,这篇论文共74
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