独创声明 | 第1页 |
学位论文版权使用授权书 | 第7-8页 |
中文摘要 | 第8-9页 |
英文摘要 | 第9-11页 |
1 引言 | 第11-18页 |
·BVD-MD的历史 | 第11页 |
·BVDV生物学特性 | 第11-13页 |
·BVDV形态和理化特性 | 第11页 |
·瘟病毒及BVDV分型 | 第11-13页 |
·BVDV的主要蛋白功能 | 第13-14页 |
·目前对BVDV E2的研究 | 第14-15页 |
·BVDV的持续性感染 | 第15-16页 |
·持续性感染的原因 | 第15页 |
·持续性感染的危害 | 第15-16页 |
·目前国内外对BVD的防治情况 | 第16页 |
·本实验研究的目的和意义 | 第16-18页 |
2 材料和方法 | 第18-28页 |
·实验材料 | 第18-20页 |
·病毒与细胞 | 第18页 |
·质粒与菌种 | 第18页 |
·主要试剂 | 第18页 |
·引物 | 第18-19页 |
·主要仪器 | 第19-20页 |
·实验方法 | 第20-28页 |
·BVDV E~(rns)基因的克隆及鉴定 | 第20-21页 |
·BVDV E~(rns)、E2基因真核表达转移载体的构建 | 第21-22页 |
·E~(rns)在昆虫细胞中的表达 | 第22-24页 |
·E~(rns)和E2基因重组酵母转移载体的构建 | 第24-28页 |
3 结果与分析 | 第28-39页 |
·含有E~(rns)基因的杆状病毒转移载体的构建 | 第28-29页 |
·重组质粒pMD-18T-E~(rns)的鉴定 | 第28页 |
·重组质粒pBlueBacHis2A-E~(rns)的鉴定 | 第28-29页 |
·含有E2的杆状病毒转移载体的构建 | 第29-30页 |
·E~(rns)基因在杆状病毒系统中的表达 | 第30-31页 |
·转染及重组病毒的纯化 | 第30页 |
·重组病毒的PCR鉴定 | 第30-31页 |
·表达产物SDS-PAGE分析和Western-blotting检测 | 第31页 |
·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第31页 |
·表达产物的western-blotting检测 | 第31页 |
·含有E~(rns)基因的毕赤酵母转移载体的构建 | 第31-34页 |
·E~(rns)基因的扩增 | 第31-32页 |
·重组质粒pMD18-T-E~(rns)的鉴定 | 第32页 |
·重组质粒pPIC9K-E~(rns)的鉴定 | 第32-33页 |
·E~(rns)基因的核苷酸序列的测定分析 | 第33-34页 |
·含有BVDV E2基因的毕赤酵母转移载体的构建 | 第34-36页 |
·BVDV E2基因的扩增 | 第34页 |
·pMD18-T-E2的鉴定 | 第34-35页 |
·重组质粒pPIC9K-E2的鉴定 | 第35页 |
·E2基因的核苷酸序列测定分析 | 第35-36页 |
·含有E~(rns)、E2基因重组酵母转化子的鉴定 | 第36-38页 |
·pPIC9K-E~(rns)、pPIC9K-E2的线性化鉴定 | 第36-37页 |
·高拷贝转化子的筛选 | 第37页 |
·重组毕赤酵母表型的鉴定 | 第37页 |
·重组转化子的PCR鉴定 | 第37-38页 |
·P.Pastoris GS115表达BVDV E~(rns)蛋白SDS-PAGE电泳结果 | 第38-39页 |
4 讨论 | 第39-42页 |
·目的片段的选择 | 第39页 |
·巴斯德毕赤酵母(P.Pastoris)表达系统对目的基因的要求 | 第39-40页 |
·选用猪瘟血清作为检测BVDV抗体的原因 | 第40页 |
·E2基因的构建 | 第40页 |
·E~(rns)基因的表达 | 第40-42页 |
5 结论 | 第42-43页 |
致谢 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-49页 |
攻读学位期间发表学位论文 | 第49页 |