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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--咔唑降解菌株的筛选及其邻裂双加氧酶的克隆与鉴定
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咔唑降解菌株的筛选及其邻裂双加氧酶的克隆与鉴定
 
     论文目录
 
中文摘要第1-5页
英文摘要第5-10页
引言第10-19页
 1. 芳香族化合物生物降解的研究现状第10-11页
 2. 细菌生物降解途径的遗传与进化第11-12页
 3. 咔唑降解途径和联苯双加氧酶的研究第12-17页
   ·咔唑降解途径第12-14页
   ·联苯双加氧酶基因簇的研究第14-16页
   ·咔唑降解基因簇与联苯降解基因簇的相关性第16-17页
 4. 基因工程菌在芳香族化合物生物降解中的应用第17-18页
 5. 本研究工作的意义及目的第18-19页
第一章、咔唑降解菌株的富集培养与菌种鉴定第19-32页
 1. 材料与方法第20-26页
   ·材料第20-22页
   ·实验仪器第22页
   ·实验方法第22-26页
     ·咔唑降解菌株的富集培养第22页
     ·细菌的革兰氏染色第22页
     ·165 rDNA 基因的克隆与鉴定第22-26页
     ·插入片段的序列测定及分析第26页
     ·PJ053 在不同pH条件下生长曲线的测定第26页
 2. 结果第26-30页
   ·样品的富集培养与菌种的分离纯化第26-27页
   ·菌株的165 rDNA 分子生物学鉴定第27-28页
   ·PJ053 菌株的特性分析第28-30页
 3. 讨论第30-32页
第二章 PJ053 菌株中2 , 3 -二羟基联苯双加氧酶(23DHBD) 基因和3, 4 -二羟苯乙酸-2 , 3 -双加氧酶(HPCD) 基因的克隆、鉴定与菌株中基因簇的解析第32-70页
 1. 材料与方法第33-47页
   ·材料第33-34页
   ·实验仪器第34页
   ·实验方法第34-47页
     ·基因组文库的构建第34-37页
     ·2 , 3- 二羟基联苯双加氧酶(23DHBD) 基因和3 , 4 - 二羟苯乙酸- 2 ,3-双加氧酶(HPCD) 基因的克隆及过表达载体的构建第37-40页
     ·23DHBD 基因在PJ053 基因组DNA 上的定位第40-42页
     ·23DHBD 和HPCD 蛋白表达及纯化第42-43页
     ·23DHBD 和HPCD 融合蛋白抗体的制备及抗体效价的检测第43-45页
     ·23DHBD 和HPCD 蛋白的 Western-blot 检测第45-46页
     ·不同菌株中23DHBD 酶活分析第46-47页
 2. 结果第47-66页
   ·PJ053 基因组文库的构建第47-53页
     ·PJ053 基因组DNA 的不完全酶切条件的优化第47-48页
     ·PJ053 基因组DNA 片段与pUC19 的连接、转化与筛选第48-49页
     ·阳性克隆的酶切鉴定第49-50页
     ·阳性克隆的序列测定第50-53页
   ·两株阳性克隆质粒中插入片段的软件分析第53-59页
     ·pUCW402 中插入片段的 GenSCAN 软件分析第53页
     ·pUCW402 中插入片段的 BLAST 分析第53-56页
     ·pUCW331 中插入片段的 GenSCAN 软件分析第56页
     ·pUCW331 中插入片段的 BLAST 分析第56-59页
     ·23DHBD 基因的多态性分析第59页
   ·23DHBD 基因和HP CD 基因的克隆及鉴定第59-61页
     ·23DHBD 基因在 PJ053 基因组 DNA 上的定位第59-60页
     ·23DHBD 基因和H PCD 基因的PCR 亚克隆第60-61页
   ·23DHBD 基因和HP CD 基因在不同菌株中的表达第61-64页
     ·23DHBD 基因和H PCD 基因的原核表达第61-62页
     ·23DHBD 和 HPCD 的蛋白纯化第62-63页
     ·23DHBD 和HPCD 抗体的制备及 ELASE 检测第63页
     ·基因工程菌和PJ053中23DHBD 和HPCD 表达情况的Western 检测第63-64页
   ·不同菌株中23DHBD 酶活分析第64-66页
     ·最适温度和最适pH 的确定第64-65页
     ·不同底物条件下酶活的测定第65-66页
 3. 讨论第66-70页
   ·PJ053 基因组文库构建第66页
   ·23DHBD 和HPCD 的解析第66-67页
   ·基因工程菌株与野生菌株比较第67页
   ·PJ053 菌株中芳香族化合物降解途径解析第67-70页
第三章 咔唑降解基因簇中carB 基因的克隆与表达第70-78页
 1. 材料与方法第71-73页
   ·材料第71-72页
   ·实验仪器第72页
   ·实验方法第72-73页
     ·CarB 基因的克隆与鉴定第72-73页
     ·BL21(pETW-JS1) 和BL21(pETW-JH2) 蛋白诱导表达第73页
 2. 结果第73-76页
   ·咔唑降解途径中carB 基因的克隆及鉴定第73-76页
   ·carB 基因序列的序列分析第76页
   ·carB 基因的表达第76页
 3. 讨论第76-78页
结论第78-80页
 1 .对四个土壤样品的菌种进行富集培养, 筛选到12株咔唑降解菌株第78页
 2 .节杆菌 PJ053 形态 、生长条件及进化分析结果第78页
 3 .构建了节杆菌PJ053基因组文库并获得两株阳性克隆第78页
 4 . 首次在节杆菌 PJ053中发现了23DHBD 基因第78-79页
 5 .亚克隆23 DHBD和 HPCD基因并构建了蛋白高效表达的基因工程菌第79页
 6 .对23DHBD和HPCD进行蛋白表达 、 纯化并制备多克隆抗体 。基因工程菌株与野生型菌株 PJ053表达23DHBD和HPCD蛋白的水平进行了 Western Blotting检 测第79页
 7 .从JS061和JH062菌株中克隆了CarB基 因第79-80页
参考文献第80-88页
附录第88-92页
致 谢第92-93页
在学期间公开发表论文及著作情况第93页

 
 
论文编号BS1395119,这篇论文共93
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