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Paenibacillus cookii GX-4的β-葡萄糖苷酶基因的克隆、表达、酶学性质研究与分子改造 |
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| 论文目录 |
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| 摘要 | 第1-6页 | | ABSTRACT | 第6-11页 | | 第一章 前言 | 第11-21页 | | ·空气污染与能源危机 | 第11页 | | ·纤维素与纤维素酶的简介 | 第11-12页 | | ·β-葡萄糖苷酶的简介 | 第12-13页 | | ·β-葡萄糖苷酶的研究 | 第13-14页 | | ·β-葡萄糖苷酶的分子催化以及合成反应机制 | 第14-15页 | | ·β-葡萄糖苷酶的应用 | 第15-16页 | | ·β-葡萄糖苷酶在食品上的应用 | 第15页 | | ·β-葡萄糖苷酶在大豆异黄酮制备中的应用 | 第15页 | | ·β-葡萄糖苷酶在制造白藜芦醇的应用 | 第15-16页 | | ·基因组文库的构建 | 第16-17页 | | ·β-葡萄糖苷酶的反馈抑制 | 第17页 | | ·酶的分子改造 | 第17-19页 | | ·酶的定向进化 | 第18页 | | ·酶的定点突变 | 第18页 | | ·酶分子改造的应用 | 第18-19页 | | ·本论文研究的意义以及工作 | 第19-20页 | | ·技术路线 | 第20-21页 | | 第二章 材料与方法 | 第21-40页 | | ·实验材料 | 第21-25页 | | ·菌株以及质粒 | 第21页 | | ·酶与主要使用试剂 | 第21页 | | ·培养基与溶液的配制 | 第21-25页 | | ·方法与步骤 | 第25-40页 | | ·P.cookii GX-4的培养 | 第25页 | | ·P.cookii GX-4的基因组DNA的提取 | 第25页 | | ·基因组文库的构建 | 第25-27页 | | ·P.cookii GX-4基因组文库的筛选 | 第27页 | | ·碱裂解法提取质粒法 | 第27-28页 | | ·感受态细胞制备与转化 | 第28页 | | ·重组fosmid的亚克隆及序列分析 | 第28-29页 | | ·含β-葡萄糖苷酶基因的亚克隆序列分析 | 第29页 | | ·β-葡萄糖苷酶基因Pbgl的克隆 | 第29-30页 | | ·PCR产物与表达载体的酶切 | 第30-31页 | | ·PCR产物与载体的连接 | 第31页 | | ·连接产物的转化以及酶切验证 | 第31页 | | ·重组菌株的诱导表达 | 第31页 | | ·重组酶的纯化 | 第31-32页 | | ·纯化蛋白的SDS-PAGE及酶谱分析 | 第32页 | | ·蛋白质标准曲线的绘制及蛋白质定量分析 | 第32-33页 | | ·β-葡萄糖苷酶的酶学性质的测定 | 第33-36页 | | ·Pbgl的分子改造 | 第36-40页 | | 第三章 结果与分析 | 第40-76页 | | ·P.cookii GX-4的fosmid基因组文库的构建 | 第40-41页 | | ·基因组文库的质量评估 | 第41页 | | ·含β-葡萄糖苷酶基因克隆的筛选 | 第41-42页 | | ·重组fosmid的亚克隆 | 第42-43页 | | ·P.cookii GX-4 β-葡萄糖苷酶基因的序列分析 | 第43-46页 | | ·β-葡萄糖苷酶基因Pbgl的PCR扩增 | 第46页 | | ·重组质粒pSE-Pbgl的构建 | 第46-49页 | | ·pSE-Pbgl重组质粒的构建 | 第46-47页 | | ·pSE-Pbgl重组质粒的验证 | 第47-49页 | | ·镍亲和层析纯化蛋白的SDS-PAGE和酶谱分析 | 第49-50页 | | ·标准曲线的绘制 | 第50-52页 | | ·蛋白质标准曲线的绘制 | 第50-51页 | | ·pNP标准曲线的绘制 | 第51-52页 | | ·纯化重组酶pSE-Pbgl的酶学性质的研究 | 第52-65页 | | ·Pbgl的最适温度的测定 | 第52页 | | ·Pbgl的最适pH的测定 | 第52-53页 | | ·Pbgl的Km和Vmax值的测定 | 第53-54页 | | ·Pbgl的热稳定性的分析 | 第54页 | | ·Pbgl的pH稳定性的测定 | 第54-55页 | | ·金属离子对Pbgl酶活力的影响的测定 | 第55-56页 | | ·化学试剂对Pbgl酶活力的影响的测定 | 第56页 | | ·EDTA对Pbgl酶活力的影响的测定 | 第56-57页 | | ·糖对Pbgl酶活力的影响的测定 | 第57-58页 | | ·Pbgl的底物特异性的测定 | 第58-59页 | | ·Pbgl的水解产物分析 | 第59-64页 | | ·Pbgl对葡萄糖的耐受性研究 | 第64-65页 | | ·β-葡萄糖苷酶基因Pbgl的分子改造 | 第65-76页 | | ·β-葡萄糖苷酶基因Pbgl的随机突变 | 第65-66页 | | ·β-葡萄糖苷酶基因Pbgl的定点突变 | 第66-68页 | | ·定点突变体的获得 | 第68页 | | ·突变体序列分析 | 第68-69页 | | ·突变体的SDS-PAGE分析 | 第69页 | | ·野生酶与突变体的酶学性质比较分析 | 第69-76页 | | 第四章 讨论 | 第76-82页 | | ·fosmid文库的构建以及文库的筛选效率 | 第76页 | | ·Pbgl是一个碱性β-葡萄糖苷酶 | 第76-77页 | | ·Pbgl的底物特异性 | 第77-78页 | | ·β-葡萄糖苷酶的葡萄糖耐受性研究 | 第78-82页 | | 第五章 结论与展望 | 第82-85页 | | ·结论 | 第82-83页 | | ·问题与展望 | 第83-85页 | | 附录 | 第85-90页 | | 参考文献 | 第90-98页 | | 致谢 | 第98-99页 | | 攻读学位期间发表的学术论文与专利 | 第99页 |
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论文编号BS2043819，这篇论文共99页
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