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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶的克隆表达及其应用
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N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶的克隆表达及其应用
 
     论文目录
 
目录第7-10页
摘要第10-11页
ABSTRACT第11-12页
缩略语第13-14页
第1章 绪论第14-26页
    1.研究背景第14-25页
        1.1.唾液酸的发现第14页
        1.2.唾液酸的性质及检测第14-15页
        1.3.自然界中存在的唾液酸第15-16页
        1.4.唾液酸的生物学功能第16-18页
        1.5.唾液酸与疾病第18-19页
        1.6.唾液酸的制备方法第19-22页
        1.7.NAL和AGE概况第22-25页
    2.立题依据第25-26页
第2章 N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶基因的克隆第26-37页
    1.材料第26-28页
        1.1.试剂第26页
        1.2.菌种和质粒第26-27页
        1.3.培养基第27页
        1.4.缓冲液与溶液第27-28页
        1.5.主要实验仪器第28页
    2.方法第28-32页
        2.1.菌种的培养和保藏第28页
        2.2.碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA第28-29页
        2.3.大肠杆菌感受态细胞的制备第29页
        2.4.大肠杆菌质粒转化第29页
        2.5.DNA片段凝胶回收(V-gene DNA Gel Extraction Kit)第29-30页
        2.6.质粒DNA的酶切第30页
        2.7.质粒与外源片段的连接第30页
        2.8.PCR扩增第30-31页
        2.9.RT-PCR反应第31页
        2.10.猪肾总RNA的提取第31-32页
        2.11.微量制备鱼腥藻染色体第32页
        2.12.两种N-乙酰D-葡萄糖胺2-差向异构酶基因亚克隆的构建第32页
    3.结果与讨论第32-36页
        3.1.猪肾总RNA的抽提第32-33页
        3.2.猪肾N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶基因的克隆第33-34页
        3.3.微量制备鱼腥藻染色体第34页
        3.4.鱼腥藻N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶基因的克隆第34-36页
    4.结论第36-37页
第3章 N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶基因的表达第37-54页
    1.材料第37-40页
        1.1.试剂第37-38页
        1.2.培养基第38页
        1.3.蛋白纯化亲和树脂第38页
        1.4.缓冲液与溶液第38-39页
        1.5.主要仪器设备第39页
        1.6.菌种和质粒第39-40页
    2.方法第40-45页
        2.1.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳第40页
        2.2.菌体破碎第40-41页
        2.3.N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶的纯化第41页
        2.4.蛋白含量的测定(Bradford法)第41-42页
        2.5.猪肾N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶基因表达质粒的构建及诱导表达第42页
        2.6.鱼腥藻N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶基因表达质粒的构建及诱导表达第42页
        2.7.N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶活性测定第42-45页
    3.结果与讨论第45-53页
        3.1.猪肾N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶基因表达质粒的构建及诱导表达第45-46页
        3.2.鱼腥藻N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶基因表达质粒的构建及诱导表达第46-47页
        3.3.N-乙酰-D-葡萄糖胺2-差向异构酶活性测定第47-52页
        3.4.猪肾AGE与鱼腥藻AGE表达产量比较第52-53页
    4.结论第53-54页
第4章 双酶法制备N-乙酰神经氨酸的研究第54-68页
    1.材料第54-55页
        1.1.试剂第54页
        1.2.培养基第54页
        1.3.菌种与质粒第54-55页
    2.方法第55-59页
        2.1.Neu5Ac的HPLC检测第55-56页
        2.2.NAL酶活测定第56页
        2.3.AGE酶活测定第56页
        2.4.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳第56-57页
        2.5.产酶基因工程菌的诱导表达第57页
        2.6.粗酶液制备第57页
        2.7.NAL与AGE共表达基因工程菌的构建及制备Neu5Ac实验第57-58页
        2.8.单独表达AGE和NAL制备Neu5Ac第58-59页
        2.9.全细胞转化制备Neu5Ac第59页
    3.结果与讨论第59-67页
        3.1.NAL与AGE共表达基因工程菌的构建及Neu5Ac的制备第59-62页
        3.2.单独表达AGE和NAL制备Neu5Ac第62-67页
        3.3.全细胞转化第67页
    4.结论第67-68页
全文总结第68-69页
参考文献第69-73页
附录1 猪AGE酶基因测序结果第73-74页
附录2 鱼腥藻AGE基因测序结果第74-75页
附录3 N-乙酰神经氨酸质谱检测图第75-76页
附录4 N-乙酰-D-葡萄糖氨质谱检测第76-77页
附录5 双酶转化混合物质谱检测图第77-78页
致谢第78页

 
 
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