| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-24页 |
| 1 昆虫的嗅觉感受机制 | 第9-11页 |
| 1．1 昆虫感受信息化学物质的一般途径 | 第9-10页 |
| 1．2 气味的受体 | 第10页 |
| 1．3 气味结合蛋白 | 第10页 |
| 1．4 化电信号转导 | 第10-11页 |
| 2 昆虫气味结合蛋白的研究进展 | 第11-16页 |
| 2．1 气味结合蛋白的生化特性和分子结构 | 第11-13页 |
| 2．2 气味结合蛋白的生理作用 | 第13-14页 |
| 2．3 气味结合蛋白在触角中的分布 | 第14页 |
| 2．4 昆虫气味结合蛋白基因的分子生物学研究进展 | 第14-16页 |
| 3 cDNA文库的发展及应用 | 第16-22页 |
| 3．1 克隆载体的改造 | 第16-18页 |
| 3．2 提高双链cDNA的合成效率 | 第18-21页 |
| 3．3 筛选cDNA文库的方法 | 第21页 |
| 3．4 cDNA文库的应用 | 第21-22页 |
| 4 研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-34页 |
| 1 实验材料 | 第24-27页 |
| 1．1 供试虫源 | 第24页 |
| 1．2 主要试剂和溶液 | 第24-26页 |
| 1．3 主要仪器和设备 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-34页 |
| 2．1 家蝇触角总RNA的提取与检测 | 第27页 |
| 2．2 家蝇气味结合蛋白基因cDNA片段的克隆与序列分析 | 第27-29页 |
| 2．2．1 引物的设计 | 第27页 |
| 2．2．2 第一链cDNA合成 | 第27-28页 |
| 2．2．3 PCR扩增cDNA片段 | 第28页 |
| 2．2．4 PCR产物的回收 | 第28-29页 |
| 2．2．5 PCR回收产物与pGEM—T克隆载体连接 | 第29页 |
| 2．2．6 大肠杆菌JM109感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2．2．7 连接产物转化大肠杆菌JM109感受态细胞 | 第29页 |
| 2．2．8 重组质粒的提取 | 第29页 |
| 2．2．9 目的DNA片段检测 | 第29页 |
| 2．2．10 克隆基因的序列测定和序列分析 | 第29页 |
| 2．3 家蝇触角cDNA文库的构建 | 第29-33页 |
| 2．3．1 第一链cDNA的合成 | 第30页 |
| 2．3．2 cDNA的长距离PCR(LD—PCR) | 第30页 |
| 2．3．3 LD—PCR产物的蛋白酶K消化及cDNA纯化 | 第30页 |
| 2．3．4 cDNA进行Sfi酶切 | 第30页 |
| 2．3．5 cDNA片段的分级分离 | 第30页 |
| 2．3．6 cDNA与载体的连接 | 第30-32页 |
| 2．3．7 重组质粒的电转化反应 | 第32页 |
| 2．3．8 文库滴度的测定 | 第32页 |
| 2．3．9 文库扩增和保存 | 第32页 |
| 2．3．10 文库克隆重组率和插入片段长度的检测 | 第32页 |
| 2．3．11 引物对Ⅰ和引物对Ⅱ扩增cDNA文库 | 第32-33页 |
| 2．4 家蝇气味结合蛋白OBP3全长基因MdomOBP3的克隆与序列分析 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-47页 |
| 1 家蝇触角总RNA的提取与完整性检测 | 第34页 |
| 2 家蝇气味结合蛋白基因cDNA片段的克隆与序列分析 | 第34-40页 |
| 2．1 RT—PCR扩增气味结合蛋白cDNA片段 | 第34-35页 |
| 2．2 阳性重组质粒的PCR鉴定 | 第35页 |
| 2．3 家蝇气味结合蛋白基因cDNA片段序列及推导的氨基酸序列 | 第35-37页 |
| 2．4 家蝇气味结合蛋白序列与其他生物序列的同源性分析 | 第37-39页 |
| 2．5 小结 | 第39-40页 |
| 3 cDNA文库的构建和质量评价 | 第40-44页 |
| 3．1 双链cDNA的合成与扩增 | 第40-41页 |
| 3．2 双链cDNA片段酶切后的分级分离 | 第41页 |
| 3．3 连接反应 | 第41页 |
| 3．4 文库滴度测定 | 第41-42页 |
| 3．5 cDNA文库的重组率及插入片段长度的检测 | 第42-43页 |
| 3．6 引物对Ⅰ和引物对Ⅱ扩增cDNA文库结果分析 | 第43-44页 |
| 3．7 小结 | 第44页 |
| 4 家蝇气味结合蛋白OBP3全长基因MdomOBP3的克隆与序列分析 | 第44-47页 |
| 第四章 讨论 | 第47-54页 |
| 1 两个气味结合蛋白基因cDNA片段的克隆 | 第47-49页 |
| 1．1 RNA操作的注意事项 | 第47-48页 |
| 1．2 PCR扩增目的基因片段 | 第48页 |
| 1．3 目的基因的克隆 | 第48页 |
| 1．4 气味结合蛋白基因片段MdomOBP1和MdomOBP2全长的克隆 | 第48-49页 |
| 2 全长cDNA文库的构建 | 第49-51页 |
| 2．1 SMART技术构建文库的优点 | 第49页 |
| 2．2 载体的选择 | 第49-50页 |
| 2．3 PCR循环数的影响 | 第50页 |
| 2．4 连接效率 | 第50页 |
| 2．5 几种新的全长cDNA文库的构建方法 | 第50-51页 |
| 3 网络生物信息资源的利用及生物信息学的发展 | 第51-52页 |
| 3．1 网络生物信息资源的利用 | 第51-52页 |
| 3．2 生物信息学的发展 | 第52页 |
| 4 后期工作设想 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 附录 | 第65-77页 |
| 在校期间已发表或待发表的文章 | 第77页 |
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