| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1. 前言 | 第10-21页 |
| ·放线菌概述 | 第10页 |
| ·放线菌基因组研究概况 | 第10-12页 |
| ·天蓝链霉菌[Streptomyces coelicolor A3(2)]基因组 | 第11页 |
| ·除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis) | 第11-12页 |
| ·放线菌次生代谢的遗传特征 | 第12-15页 |
| ·聚酮类次生代谢的生物合成 | 第12-13页 |
| ·非核糖体多肽类的生物合成(NRPS合成途径) | 第13-15页 |
| ·新抗生素发现的策略 | 第15-20页 |
| ·稀有放线菌的分离 | 第15-17页 |
| ·抗菌活性筛选 | 第17页 |
| ·生物技术途径对新抗生素的发掘 | 第17-19页 |
| ·组合生物合成 | 第19-20页 |
| ·研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 2. 材料与方法 | 第21-33页 |
| ·试验材料与土样采集地点 | 第21-25页 |
| ·菌株 | 第21-22页 |
| ·质粒 | 第22页 |
| ·引物 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-24页 |
| ·抗生素 | 第24页 |
| ·酶和生化试剂 | 第24页 |
| ·试验仪器 | 第24-25页 |
| ·试验方法 | 第25-33页 |
| ·土壤放线菌的分离和筛选方法 | 第25-26页 |
| ·土样的采集 | 第25页 |
| ·土样的预处理 | 第25页 |
| ·稀有放线菌的分离 | 第25页 |
| ·放线菌的纯化和保藏 | 第25-26页 |
| ·活性测定 | 第26页 |
| ·大肠杆菌(Escherichia coli)质粒的提取(Sambrook and Russell,2001) | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第27-28页 |
| ·E.coli的Ca2+法感受态的制备及转化(Sambrook and Russell,2001) | 第27页 |
| ·E.coli电击感受态的制备(Sambrook and Russell,2001) | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌于放线菌间的结合转移操作流程(Flett et al.,1997) | 第28页 |
| ·放线菌孢子悬液的制备 | 第28-29页 |
| ·放线菌基因组DNA的小量提取(Kieser et al.,2000) | 第29页 |
| ·PCR扩增反应 | 第29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·DNA的体外操作 | 第30-31页 |
| ·DNA的体外连接反应 | 第30-31页 |
| ·基因组DNA酶切及回收 | 第31页 |
| ·测序及序列分析 | 第31页 |
| ·系统发育树分析 | 第31-32页 |
| ·分离放线菌代谢物质的光谱谱析方法 | 第32页 |
| ·扫描电镜样品的制备 | 第32-33页 |
| 3. 结果与分析 | 第33-60页 |
| ·土壤放线菌的分离及拮抗筛选 | 第33-41页 |
| ·土壤放线菌的分离 | 第33-35页 |
| ·土壤放线菌活性筛选结果 | 第35-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| ·放线菌菌株甲醇提取物的光谱谱析与基因组信息普查 | 第41-55页 |
| ·放线菌菌株甲醇提取物的光谱谱析 | 第41-43页 |
| ·分离放线菌基因组信息普查 | 第43-55页 |
| ·放线菌基因组DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·放线菌基因组DNA的PCR检测 | 第44-48页 |
| ·扩增出的PKSⅡ聚酮合成酶基因片段的序列分析 | 第48-51页 |
| ·扩增出得NRPS基因片段序列分析 | 第51-52页 |
| ·部分菌株的初步鉴定 | 第52-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| ·Ⅱ型聚酮合成基因簇的克隆 | 第55-60页 |
| ·基因簇体内重组克隆策略 | 第55-56页 |
| ·重组克隆基因簇的选择 | 第56页 |
| ·重组质粒pWX1的构建 | 第56-58页 |
| ·重组质粒pWX1接合转移导入Streptomyces sp.44 | 第58页 |
| ·Streptomyces sp.44Ⅱ型聚酮合成基因簇的克隆 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 4. 讨论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附表1.Ⅱ型PKS序列 | 第68-69页 |
| 附表2.紫外扫描部分图谱 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
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