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甘草查尔酮异甘草素的化学结构修饰及抗宫颈癌活性研究 |
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【摘要】：目的：建立一种快速鉴别胀果甘草品种的简便方法；以甘草查尔酮类化合物异甘草素(Isoliquiritigenin,ILG)为先导化合物,对其结构进行化学修饰制备目标化合物,并考查对抗人子宫颈癌活性的研究。方法：(1)以胀果甘草中的特殊黄酮类成分甘草查尔酮A为对照品,采用薄层色谱法鉴别胀果甘草品种的实验方法进行鉴定。(2)采用酸性催化法、羟基保护法和微波固相合成法等三种方法对异甘草素衍生物3-甲氧基异甘草素(3-MO-ILG)进行人工全合成,然后选择一种产率较高的合成方法——微波固相合成法,合成其余的目标化合物。(3)以人子宫颈癌SiHa细胞和HeLa细胞为体外抗癌实验模型,以临床常用的化疗药顺铂作为阳性对照组,利用目标化合物对SiHa细胞和HeLa细胞分别进行24 h、48 h和72 h的药物干预；采用MTT法测定其对子宫颈癌SiHa细胞和HeLa细胞增殖抑制率,筛选出具有生物活性较强的候选药物；采用流式细胞仪法测定促进子宫颈癌细胞凋亡作用；最后进行构效关系的分析。结果：(1)根据薄层鉴定结果可观察到,不同产地的胀果甘草乙醇提取物中都具有符合于甘草查尔酮A的1个亮黄色荧光斑点。经制备薄层法分离纯化并重结晶后获得其与对照品相似的亮黄色针状结晶,经理化鉴定和光谱鉴定后甘草查尔酮A。(2)通过酸性催化法、羟基保护法和微波固相合成法制备3-甲氧基异甘草素的产率为8.9%、9.27%和57.60%。选择了一种产率较高的方法——微波固相合成法,利用此方法合成异甘草素、3,4'-二羟基-4-甲氧基查尔酮、3-羟基异甘草素、4,4'-二羟基查尔酮的产率分别为58.9%、52.9%、48.89%、38.75%。(3)利用MTT法测定SiHa细胞和HeLa细胞增殖抑制率,研究结果显示,在浓度为12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、 150μg/ml和200 μg/ml的范围之间,目标化合物对SiHa细胞和HeLa细胞干预24 h、48 h和72 h的抑制率分别约为10%-50%、20%-70%和40%-800%,具有浓度依赖性和时间依赖性。(4)筛选出具有较强生物活性的目标化合物——异甘草素、3-甲氧基异甘草素、3-羟基异甘草素和3,4'-二羟基-4-甲氧基查尔酮,再用流式细胞仪法测定其对SiHa细胞和HeLa细胞的凋亡作用,实验结果表明,在100 μg/ml浓度下,它们对SiHa细胞和HeLa细胞的凋亡率为30%,具有明显的促凋亡作用。结论：(1)薄层色谱法是简便快速鉴定胀果甘草品种的一种有效鉴定方法,为胀果甘草的快速品种鉴定、甘草的资源考察研究以及其产品的质量控制将具有一定的参考价值。(2)通过酸性催化法、羟基保护法和微波固相合成法等三种方法的研究,筛选出一种绿色、低耗能、零污染、操作简便、成本低和产率高的方法——微波固相合成法,完成了查尔酮异甘草素衍生物初步的结构修和目标化合物的合成；并发现甘草查尔酮类化合物对SiHa细胞和HeLa细胞具有较显著的抑制活性和促进凋亡作用,此结果对从异甘草素衍生物中筛选出具有抗子宫颈癌的有效候选药物奠定重要的基础。
【关键词】：甘草查尔酮 异甘草素衍生物 人子宫颈癌细胞 增殖抑制 细胞凋亡
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R284;R285
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