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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--甲基对硫磷特异性单克隆抗体和单链抗体的制备及应用
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甲基对硫磷特异性单克隆抗体和单链抗体的制备及应用
 
     论文目录
 
中文摘要第9-11页
Abstract第11-12页
1 前言第13-24页
    1.1 有机磷农药残留现状及其危害第13-14页
        1.1.1 有机磷农药简介第13页
        1.1.2 有机磷农药残留现状第13-14页
        1.1.3 有机磷农药残留危害第14页
    1.2 有机磷农药残留检测技术及应用现状第14-17页
        1.2.1 色谱法第15页
        1.2.2 光谱法第15-16页
        1.2.3 酶抑制法第16页
        1.2.4 免疫分析法第16-17页
    1.3 小分子污染物ELISA检测方法的研究进展第17-19页
        1.3.1 多克隆抗体及单克隆抗体的应用第17-18页
        1.3.2 基因工程抗体的应用第18-19页
    1.4 噬菌体展示技术研究进展及应用第19-21页
        1.4.1 噬菌体展示技术基本原理概述第19页
        1.4.2 噬菌体表面展示文库的类型第19-20页
            1.4.2.1 噬菌体抗体库第19-20页
            1.4.2.2 噬菌体展示随机肽库第20页
        1.4.3 噬菌体展示技术的应用第20-21页
    1.5 单链抗体的研究进展及其应用第21-23页
        1.5.1 单链抗体概述第21页
        1.5.2 单链抗体的研究进展第21-22页
        1.5.3 单链抗体融合蛋白的应用第22-23页
    1.6 研究目的及意义第23页
    1.7 研究内容第23-24页
2 材料与方法第24-43页
    2.1 材料第24-28页
        2.1.1 载体与菌株第24页
        2.1.2 实验动物第24页
        2.1.3 主要生化试剂第24页
        2.1.4 主要仪器设备第24-25页
        2.1.5 培养基和试剂的配制第25-28页
            2.1.5.1 培养基的配制第25-26页
            2.1.5.2 实验试剂的配制第26-28页
    2.2 实验方法第28-43页
        2.2.1 甲基对硫磷人工抗原的合成第28页
        2.2.2 BALB/C小鼠免疫第28页
        2.2.3 小鼠血清效价检测第28-29页
        2.2.4 甲基对硫磷单克隆抗体的制备第29-31页
            2.2.4.1 杂交瘤细胞的制备与筛选第29-30页
            2.2.4.2 杂交瘤细胞的单克隆化第30页
            2.2.4.3 单克隆抗体的大量制备第30-31页
            2.2.4.4 杂交瘤细胞的冻存第31页
        2.2.5 基于单克隆抗体的直接竞争ELISA检测方法的建立第31-33页
            2.2.5.1 单克隆抗体偶联辣根过氧化物酶第31-32页
            2.2.5.2 抗原抗体最适工作浓度的选择第32页
            2.2.5.3 直接竞争ELISA实验步骤第32页
            2.2.5.4 DC-ELISA分析条件的优化第32-33页
        2.2.6 基于单克隆抗体的间接竞争ELISA检测方法的建立第33-34页
            2.2.6.1 抗原抗体最适工作浓度的选择第33页
            2.2.6.2 间接竞争ELISA实验步骤第33-34页
            2.2.6.3 IC-ELISA分析条件的优化第34页
        2.2.7 基于单克隆抗体的ELISA检测方法的评价第34页
            2.2.7.1 标准抑制曲线的绘制第34页
            2.2.7.2 交叉反应率的测定第34页
            2.2.7.3 样品添加回收实验第34页
        2.2.8 甲基对硫磷单链抗体的制备第34-41页
            2.2.8.1 甲基对硫磷噬菌体抗体库的构建第34-36页
            2.2.8.2 噬菌体抗体库的扩增与噬菌体纯化第36-37页
            2.2.8.3 甲基对硫磷噬菌体抗体库的生物淘选第37页
            2.2.8.4 甲基对硫磷特异性单链抗体的筛选第37-39页
            2.2.8.5 生物素化单链抗体的IC-ELISA第39页
            2.2.8.6 单链抗体的大量表达和表达条件优化第39-40页
            2.2.8.7 单链抗体的体外生物素化和纯化第40-41页
        2.2.9 基于生物素化单链抗体的IC-ELISA检测方法的建立第41-42页
            2.2.9.1 抗原抗体最适工作浓度的选择第41页
            2.2.9.2 IC-ELISA测定的步骤第41页
            2.2.9.3 IC-ELISA分析条件的优化第41-42页
        2.2.10 基于生物素化单链抗体的IC-ELISA检测方法的评价第42-43页
            2.2.10.1 标准抑制曲线的建立第42页
            2.2.10.2 交叉反应率的测定第42-43页
3 结果与分析第43-60页
    3.1 甲基对硫磷单克隆抗体的制备及检测方法的建立第43-49页
        3.1.1 甲基对硫磷单克隆抗体的制备第43-44页
        3.1.2 基于单克隆抗体的DC-ELISA检测方法的条件优化第44-45页
            3.1.2.1 离子强度对DC-ELISA检测的影响第44页
            3.1.2.2 pH对DC-ELISA检测的影响第44页
            3.1.2.3 甲醇浓度对DC-ELISA检测的影响第44-45页
        3.1.3 基于单克隆抗体的IC-ELISA检测方法的条件优化第45-46页
        3.1.4 基于甲基对硫磷单克隆抗体的两种检测方法的评价第46-49页
            3.1.4.1 标准抑制曲线的绘制第46-47页
            3.1.4.2 交叉反应率测定第47-49页
            3.1.4.3 样品添加回收实验第49页
    3.2 甲基对硫磷单链抗体的筛选及检测方法的建立第49-60页
        3.2.1 噬菌体抗体库的构建第49-50页
        3.2.2 噬菌体抗体库的生物淘选第50-51页
        3.2.3 单链抗体的筛选第51-52页
        3.2.4 单链抗体的高水平表达和表达条件的优化第52-54页
            3.2.4.1 诱导温度的优化第52-53页
            3.2.4.2 IPTG浓度的优化第53页
            3.2.4.3 诱导时间的优化第53-54页
        3.2.5 单链抗体的体外生物素化、纯化和表征第54-56页
            3.2.5.1 生物素连接酶的表达第54-55页
            3.2.5.2 单链抗体的体外生物素化及纯化第55页
            3.2.5.3 Western blot验证第55-56页
        3.2.6 基于生物素化单链抗体IC-ELISA检测方法的条件优化第56-57页
        3.2.7 基于生物素化单链抗体IC-ELISA检测方法的评价第57-60页
            3.2.7.1 标准抑制曲线的绘制第57-58页
            3.2.7.2 交叉反应率的测定第58-60页
4 讨论第60-63页
    4.1 甲基对硫磷抗体的研究第60页
    4.2 甲基对硫磷单链抗体的研究第60-62页
        4.2.1 亲和素-生物素系统的应用第61页
        4.2.2 噬菌体抗体库淘选方式第61-62页
    4.3 可进行的下一步研究第62-63页
5 结论第63-64页
参考文献第64-72页
致谢第72-73页
攻读学位期间发表论文情况第73页

 
 
论文编号BS2502252,这篇论文共73
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