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玉米光周期敏感性基因ZmDPS10-2启动子结合蛋白筛选的研究
 
     论文目录
 
致谢第4-9页
摘要第9-10页
1 文献综述第10-21页
    1.1 植物光周期和光周期敏感现象第10-15页
        1.1.1 光周期和光周期敏感的发现第10-11页
        1.1.2 光期和暗期的作用第11页
        1.1.3 植物光周期敏感时期的研究第11-12页
        1.1.4 模式植物中光敏感现象的分子机制研究第12-13页
            1.1.4.1 光受体第12页
            1.1.4.2 生物钟模型第12-13页
        1.1.5 玉米光敏感性研究进展第13-15页
            1.1.5.1 玉米光周期敏感的遗传特点第13页
            1.1.5.2 玉米光敏感性QTLs定位研究第13-14页
            1.1.5.3 玉米光周期基因的克隆研究第14-15页
    1.2 NF-Y的研究进展第15-17页
        1.2.1 NF-Y的结构特点第15-16页
        1.2.2 植物NF-Y的生物功能第16-17页
    1.3 启动子第17-18页
        1.3.1 启动子的结构特点第17-18页
        1.3.2 植物启动子的类型第18页
    1.4 酵母单杂交第18-21页
        1.4.1 酵母单杂交的原理第18-19页
        1.4.2 酵母单杂交的优缺点第19-20页
        1.4.3 酵母单杂交系统的应用及发展第20-21页
            1.4.3.1 转录因子的克隆第20页
            1.4.3.2 验证已证实的DNA与蛋白质之间的互作第20页
            1.4.3.3 定位已证实互作的DNA结合域第20页
            1.4.3.4 酵母单杂交的发展第20-21页
2 引言第21-22页
3 材料与方法第22-41页
    3.1 试验材料第22-25页
        3.1.1 试验材料与取样第22页
        3.1.2 试剂与仪器第22页
        3.1.3 菌株和载体第22页
        3.1.4 实验相关试剂及培养基配制第22-24页
        3.1.5 引物第24-25页
    3.2 试验方法第25-41页
        3.2.1 目的基因的克隆与分析第25-30页
            3.2.1.1 玉米叶片DNA的提取(CTAB法)第25页
            3.2.1.2 DNA的纯化第25页
            3.2.1.3 目的片段的扩增及检测第25-27页
            3.2.1.4 目的片段与PMD18-T载体的连接及转化第27-29页
            3.2.1.5 质粒提取第29-30页
        3.2.2 诱饵载体的构建第30-31页
        3.2.3 诱饵菌株的获得第31-33页
        3.2.4 Ab A最小抑菌浓度的确定第33页
        3.2.5 酵母单杂文库的构建第33-37页
            3.2.5.1 玉米叶片总RNA的提取及检测第33页
            3.2.5.2 c DNA一链的合成及检测:第33-34页
            3.2.5.3 第二链的合成第34-35页
            3.2.5.4 对LD-PCR得到的ds c DNA柱纯化第35页
            3.2.5.5 ds c DNA和p GADT7-Rec质粒转化感受态细胞第35-36页
            3.2.5.6 酵母文库质粒提取第36-37页
        3.2.6 酵母单杂交文库质量的鉴定第37-38页
            3.2.6.1 文库检测方法第37页
            3.2.6.2 文库插入片段大小检测第37-38页
        3.2.7 从文库中筛选互作蛋白第38-39页
        3.2.8 互作蛋白的回转验证第39-40页
            3.2.8.1 重组载体的构建第39-40页
            3.2.8.2 重组质粒转入诱饵感受态细胞第40页
        3.2.9 生物信息学分析第40-41页
4. 结果与分析第41-62页
    4.1 Zm DPS10-2 基因启动子与编码区的克隆第41-42页
        4.1.1 DNA提取与检测第41页
        4.1.2 候选基因启动子与编码区的克隆第41-42页
    4.2 基因Zm DPS10-2 的结构域分析与功能预测第42-45页
        4.2.1 候选基因结构域预测第42-43页
        4.2.2 候选基因的同源性分析第43-44页
        4.2.3 启动子功能元件预测第44-45页
    4.3 诱饵载体的构建第45-47页
        4.3.1 目的片段与载体的双酶切第45-46页
        4.3.2 重组载体的菌液PCR及酶切检测第46-47页
    4.4 诱饵菌株的获得及检测第47-48页
    4.5 确定Ab A筛选浓度第48页
    4.6 酵母单杂交文库的构建及检测第48-51页
        4.6.1 RNA检测与ds c DNA的纯化第48-49页
        4.6.2 文库库容量及滴度检测第49-50页
        4.6.3 文库插入片段大小检测第50-51页
    4.7 酵母单杂交互作蛋白的筛选第51-54页
        4.7.1 阳性转化子的筛选与PCR鉴定第51-52页
        4.7.2 互作蛋白的功能注释第52-54页
    4.8 互作蛋白的回转验证第54-56页
        4.8.1 互作蛋白重组载体的构建与检测第54-55页
        4.8.2 重组质粒与诱饵质粒共转化第55-56页
    4.9 互作蛋白的生物信息学分析第56-62页
        4.9.1 氨基酸序列第56-57页
        4.9.2 蛋白基本理化性质预测第57页
        4.9.3 蛋白二级结构预测第57-58页
        4.9.4 蛋白亲疏水性预测第58-59页
        4.9.5 信号肽预测第59-60页
        4.9.6 跨膜结构域预测第60-61页
        4.9.7 亚细胞定位预测第61-62页
5 结论与讨论第62-66页
    5.1 Zm DPS10-2 基因的克隆与功能预测第63页
    5.2 酵母单杂交文库的构建与鉴定第63-64页
    5.3 酵母单杂交互作蛋白的筛选和回转验证第64-65页
    5.4 试验中遇到的问题及改进方法第65-66页
参考文献第66-77页
ABSTRACT第77-78页

 
 
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