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川白芷提取物异欧前胡素大鼠体内药动学研究
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【药学论文下载】【摘要】 目的 探讨经灌胃给药后川白芷提取物异欧前胡素大鼠体内的药物动力学特征。方法 采用高效液相色谱法,测定灌胃给药后大鼠血浆中异欧前胡素血药浓度变化,用DAS2.0药动学软件处理,计算其药物动力学参数。结果 异欧前胡素在大鼠体内过程符合二室模型特征,主要药动学参数为Tmax＝(1.6±0.000)h,Cmax＝(15.842±0.35)mg/L,AUC0-t＝(80.761±10.03)mg/(L?h),AUC0-∞＝(89.45±9.34)mg/(L?h),t1/2＝(5.101±0.24)h。结论 该方法适用于异欧前胡素的药物动力学研究。
【关键词】 白芷；异欧前胡素；高效液相色谱法；药动学参数；大鼠
Abstract：Objective To establish a HPLC method for the determnation of serum concentration of isoimperatorin in rats and study pharmacokinetic characteristic of isoimperatorin in rat after drug admiaistraction. Method The concentrations of isoimperatorin in rats were determined after drug administration and the pharmacokinetic parameters of isoimperatorin were estimated by DAS2.0 computer program. Result The concentration-time profiles were fitted with open two compartment model system. The main pharmacokinetic parameters were as follows：Tmax ＝(1.6±0.000)h, Cmax ＝(15.842±0.35)mg/L, AUC0-t＝(80.761±10.03)mg/(L?h), AUC0-∞＝(89.45±9.34)mg/(L?h), t1/2＝(5.101±0.24)h. Conclusion The method is appropriate for the determination and pharmacokinetic study of isoimperatorin in rats after drug administration.
Key words：Radix angelicae dahuricae；isoimperatorin；HPLC；pharmacokinetic parameters；rat
川白芷为川产道地药材,为伞形科植物杭白芷的根。白芷中香豆素类物质为重要的活性成分,其中异欧前胡素为重要成分之一。虽有异欧前胡素大鼠体内部分药物动力学特征的报道[1-2],但对血浆中异欧前胡素含量检测方法的报道较少,亦未见以异欧前胡素单体为研究对象的相关报道。本研究以川白芷提取物异欧前胡素单体为研究对象,通过建立相关的测定方法,确定了异欧前胡素在大鼠体内的主要药物动力学特征。
1 材料
1.1 仪器与试药
瓦里安Prostar 210高效液相色谱仪；赛多利斯BP211DP (1/10万)电子天平；日本三洋超低温冰箱(-80 ℃)。白芷购于银发集团白芷GAP基地；异欧前胡素对照品购于四川省药品检验所。甲基叔丁基醚(MTBE)为色谱纯(美国TEDIA公司),水为双蒸水,甲醇为色谱纯,吐温-80为分析纯。
1.2 动物
Wistar雌性大鼠12只,体重(200±20)g,购于成都中医药大学动物中心(动管号：川实动管质第8号)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent E clipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)；柱温：室温；流动相：甲醇-水＝65∶35；流速：1.0 mL/min, 检测波长310 nm。
2.2 标准液的配制
精密称取异欧前胡素对照品3.98 mg,用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中作为对照品储备液,置于冰箱中保存备用。
2.3 供试品溶液的配制
川白芷药材由醇提、柱色谱分离制备并多次重结晶,得针状结晶体；经四川大学华西药学院测试分析中心核磁共振检测,确认为异欧前胡素单体。
精密称取100 mg样品,用吐温-80乳化并定容于25 mL容量瓶中备用。
2.4 给药采血及样品处理
大鼠禁食不禁水12 h,80 mg/kg灌胃给药后,分别于0.3、0.5、1、1.2、1.6、1.8、2、3、4、6、8、24 h时间点,大鼠眼眶取血0.5 mL,肝素抗凝。每管血中加入MTBE 2 mL,振荡5 min, 3 000 r/min离心10 min。置于超低温冰箱中冷冻至下层冰冻后,倾出取上清液并挥干,用20 μL甲醇溶解残留物进行检测。记录色谱峰面积,以外标法定量。
2.5 专属性考察
按前述方法操作,在相同的实验条件下,血浆中杂质不干扰异欧前胡素的测定。异欧前胡素保留时间为13.48 min。见图1。
2.6 线性范围及最小可定量浓度
用空白血样将对照品溶液分别稀释成浓度为15.92、7.96、3.98、1.99、0.995 mg/L样品,按“2.4”项下方法操作并测定。以峰面积对浓度进行线性回归,得回归方程：Y＝0.027X－0.245 4,R＝0.998,样品在0.995～15.92 mg/L内线性关系良好,定量检测下限为0.995 mg/L。
2.7 回收率及精密度试验
取空白血样,按“2.6”项下方法制备低、中、高3个浓度(2、6、10 mg/L)的质量控制样品,每一浓度平行操作3份,代入线性方程计算浓度,以测定值与加入的比值计算回收率,并计算日内精密度。连续3 d配制并测定上述浓度样品,考察方法日间精密度。见表1。表1 回收率测定结果(略)
2.8 药物动力学测定
经灌胃给药后,大鼠体内异欧前胡素平均血药浓度-时间曲线见图2。数据采用DAS2.0软件处理,主要药动学参数见表2。表2 异欧前胡素主要药动学参数(略)
3 讨论
本研究结果表明,异欧前胡素在大鼠体内呈二室开放模型,其血药浓度在1.6 h达到峰值,与文献[2]报道相近；主要药动学参数表明,异欧前胡素与白芷中其他香豆类成分相似[3],吸收迅速,消除较快。另外,用MTBE处理含药血样,具有安全低毒、干扰小的优点。MTBE熔点低,冷冻后分离完全；MTBE沸点低,易于挥干,因而操作简便。
【参考文献】
[1] 龚志南.中药白芷乳剂大鼠鼻腔给药的体内研究[J].中国临床药学杂志,2001,10(6)：370.
[2] 潘龙刚.白芷光敏胶囊加黑光治疗银屑病的研究[J].中成药研究,1983, (3)：30.
[3] 黄玉伟,陈晓辉,霍艳双,等.白芷提取物欧前胡素在大鼠体内的药物动力学[J].沈阳药科大学学报,2008,25(3)：215－218.
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