| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| 1.1 蛹虫草 | 第10页 |
| 1.2 蝉花 | 第10-11页 |
| 1.3 双组份系统 | 第11-14页 |
| 1.3.1 双组份系统概述 | 第11页 |
| 1.3.2 双组份系统的基本结构 | 第11-12页 |
| 1.3.3 双组份系统的反应机制 | 第12-13页 |
| 1.3.4 双组份系统的分类 | 第13-14页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第14-16页 |
| 2 蝉花组氨酸激酶（IcHK）基因的克隆和序列分析 | 第16-28页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第16-18页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第16页 |
| 2.1.2 试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第18页 |
| 2.1.5 溶液的配制 | 第18页 |
| 2.2 引物设计 | 第18-19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-21页 |
| 2.3.1 蝉花菌丝体的培养 | 第19页 |
| 2.3.2 蝉花菌丝体总RNA的提取 | 第19页 |
| 2.3.3 DNA去除反应 | 第19-20页 |
| 2.3.4 RNA反转录 | 第20-21页 |
| 2.3.5 IcHK基因ORF的PCR分析 | 第21页 |
| 2.3.6 基因测序及序列分析 | 第21页 |
| 2.4 实验结果及分析 | 第21-27页 |
| 2.4.1 蝉花总RNA提取 | 第21-22页 |
| 2.4.2 消化后的蝉花总RNA | 第22页 |
| 2.4.3 IcHK基因ORF序列PCR | 第22-23页 |
| 2.4.4 基因测序及序列分析 | 第23-27页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第27-28页 |
| 3 蛹虫草和蝉花组氨酸激酶基因受杀菌剂影响的表达 | 第28-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第28页 |
| 3.1.2 试剂 | 第28页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第28-29页 |
| 3.1.4 培养基的配置 | 第29页 |
| 3.1.5 溶液的配置 | 第29页 |
| 3.2 引物设计 | 第29-30页 |
| 3.3 实验方法 | 第30-32页 |
| 3.3.1 蛹虫草和蝉花菌丝体的培养 | 第30页 |
| 3.3.2 蛹虫草菌丝体和蝉花菌丝体的杀菌剂培养和取样 | 第30页 |
| 3.3.3 蝉花和蛹虫草菌丝体RNA的提取 | 第30页 |
| 3.3.4 基因组DNA的去除和RNA反转录 | 第30-31页 |
| 3.3.5 Real-Time PCR反应 | 第31页 |
| 3.3.6 Real-Time RCR反应数据处理 | 第31-32页 |
| 3.4 实验结果及分析 | 第32-35页 |
| 3.4.1 蛹虫草和蝉花总RNA的提取 | 第32页 |
| 3.4.2 咯菌腈对组氨酸激酶表达水平的real-time PCR检测分析 | 第32-33页 |
| 3.4.3 异菌脲对组氨酸激酶表达水平的real-time PCR检测分析 | 第33-34页 |
| 3.4.4 克菌丹对组氨酸激酶表达水平的real-time PCR检测 | 第34-35页 |
| 3.5 讨论与小结 | 第35-36页 |
| 4 蛹虫草组氨酸激酶CmHK抗体的制备及其western blotting初步分析 | 第36-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-39页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第36页 |
| 4.1.2 试剂 | 第36-37页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 4.1.4 培养基的配制 | 第37页 |
| 4.1.5 溶液的配制 | 第37-39页 |
| 4.2 制备组氨酸激酶CmHK抗体所需抗原蛋白的选择 | 第39页 |
| 4.2.1 CmHK原核表达CmHK基因部分序列 | 第39页 |
| 4.2.2 CmHK中部分序列的化学合成 | 第39页 |
| 4.3 实验方法 | 第39-49页 |
| 4.3.1 蛹虫草菌丝体的培养 | 第39-40页 |
| 4.3.2 蝉花菌丝体总RNA的提取 | 第40页 |
| 4.3.3 DNA去除反应 | 第40页 |
| 4.3.4 RNA反转录 | 第40页 |
| 4.3.5 CmHK基因ORF部分序列PCR及琼脂糖凝胶电泳检测 | 第40-41页 |
| 4.3.6 利用E.Z.N.A. ~(TM)Gel Extraction Kit胶回收PCR产物 | 第41页 |
| 4.3.7 质粒与PCR片段的双酶切 | 第41-42页 |
| 4.3.8 利用E.Z.N.A. ~(TM)Cycle-Pure Kit回收PCR产物 | 第42页 |
| 4.3.9 双酶切质粒和双酶切片段的连接 | 第42-43页 |
| 4.3.10 转化 | 第43页 |
| 4.3.11 PCR方法鉴定正确表达方向的阳性重组子 | 第43页 |
| 4.3.12 质粒抽提 | 第43-44页 |
| 4.3.13 酶切分析阳性重组质粒 | 第44-45页 |
| 4.3.14 测序 | 第45页 |
| 4.3.15 CmHK基因ORF部分的表达 | 第45页 |
| 4.3.16 CmHK基因ORF两个部分的表达蛋白的SDS-PAGE | 第45-47页 |
| 4.3.17 CmHK基因ORF两个部分的表达蛋白的纯化 | 第47页 |
| 4.3.18 抗体的制备 | 第47页 |
| 4.3.19 抗体的纯化 | 第47-48页 |
| 4.3.20 ELISA检测多克隆抗体效价 | 第48页 |
| 4.3.21 Western Blotting | 第48-49页 |
| 4.4 实验结果及分析 | 第49-56页 |
| 4.4.1 蛹虫草总RNA | 第49页 |
| 4.4.2 消化后的蛹虫草总RNA | 第49-50页 |
| 4.4.3 CmHK基因ORF部分序列PCR及产物纯化 | 第50页 |
| 4.4.4 原核表达载体的构建与验证 | 第50-51页 |
| 4.4.5 基因测序结果及序列分析 | 第51-53页 |
| 4.4.6 表达蛋白的SDS-PAGE结果 | 第53页 |
| 4.4.7 纯化蛋白 SDS-PAGE 结果 | 第53-54页 |
| 4.4.8 ELISA结果 | 第54-55页 |
| 4.4.9 Western Blotting结果 | 第55-56页 |
| 4.5 讨论与小结 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 在读期间公开发表论文（著）及科研情况 | 第67页 |
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