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CRISPR cas9基因编辑方法系统性研究小鼠生物钟基因对温度补偿和细胞周期的调控 |
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| 摘要 | 第4-6页 | | Abstract | 第6-7页 | | 第一章 背景介绍 | 第10-18页 | | 1.1 生物钟背景 | 第10-14页 | | 1.1.1 生物钟及其意义 | 第10页 | | 1.1.2 生物钟的分子机制 | 第10-13页 | | 1.1.3 生物钟的温度补偿 | 第13-14页 | | 1.2 生物钟对细胞周期的调控 | 第14-16页 | | 1.3 CRISPR cas9基因编辑系统 | 第16-18页 | | 第二章 实验材料与方法 | 第18-30页 | | 2.1 实验试剂及材料 | 第18-19页 | | 2.1.1 实验所需细胞,菌种和质粒 | 第18页 | | 2.1.2 试剂及来源 | 第18-19页 | | 2.2 试剂和溶液的配制 | 第19-21页 | | 2.3 实验仪器及型号 | 第21-22页 | | 2.4 实验方法 | 第22-30页 | | 2.4.1 细胞培养 | 第22-23页 | | 2.4.2 细胞冻存 | 第23页 | | 2.4.3 细胞复苏 | 第23-24页 | | 2.4.4 DH5 α大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 | | 2.4.5 菌落筛选 | 第24-25页 | | 2.4.6 PCR产物的回收 | 第25-26页 | | 2.4.7 普通质粒提取步骤 | 第26页 | | 2.4.8 胶回收实验方法 | 第26-27页 | | 2.4.9 去内毒素质粒提取实验 | 第27-28页 | | 2.4.10 基因组的提取 | 第28-30页 | | 第三章 节律基因系统性编辑 | 第30-48页 | | 3.1 实验方法及步骤 | 第30-37页 | | 3.1.1 px459-sgRNA载体的构建 | 第30-35页 | | 3.1.2 细胞转染及基因编辑单细胞株筛选 | 第35-37页 | | 3.2 基因编辑序列分析 | 第37-41页 | | 3.2.1 基因编辑单胞鉴定 | 第37-39页 | | 3.2.2 T7E1核酸内切酶酶切 | 第39-41页 | | 3.2.3 pLB零背景克隆 | 第41页 | | 3.3 实验结果及分析 | 第41-44页 | | 3.4 CRISPR cas9基因编辑系统的脱靶分析 | 第44-48页 | | 3.4.1 节律基因编辑脱靶位点的统计效应分析的引物设计 | 第44-45页 | | 3.4.2 节律基因编辑脱靶位点引物的设计 | 第45-46页 | | 3.4.3 PCR扩增潜在脱靶目的序列 | 第46-47页 | | 3.4.4 PCR产物的回收 | 第47页 | | 3.4.5 序列比对 | 第47-48页 | | 第四章 节律基因对生物钟节律周期长度及温度补偿的影响 | 第48-56页 | | 4.1 细胞株Lmicycle Reporter实验 | 第48页 | | 4.2 实验方法和步骤 | 第48-49页 | | 4.3 节律周期长度实验结果及分析 | 第49-52页 | | 4.4 节律基因在温度补偿中的作用 | 第52-56页 | | 4.4.1 温度补偿分析的实验方法 | 第52页 | | 4.4.2 温度补偿实验结果及分析 | 第52-56页 | | 第五章 节律基因对细胞周期的调控 | 第56-68页 | | 5.1 节律基因对细胞倍增时间的调控 | 第56-59页 | | 5.1.1 实验步骤和方法 | 第56-57页 | | 5.1.2 实验结果与分析 | 第57-59页 | | 5.2 节律基因对细胞周期时相分布的调控 | 第59-68页 | | 5.2.1 细胞流式分析 | 第59-60页 | | 5.2.2 实验步骤及方法 | 第60-61页 | | 5.2.3 实验结果及分析 | 第61-68页 | | 第六章 总结与讨论 | 第68-70页 | | 6.1 结论 | 第68-69页 | | 6.2 展望 | 第69-70页 | | 参考文献 | 第70-81页 | | 附录 | 第81-107页 | | 致谢 | 第107页 |
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论文编号BS4227970，这篇论文共107页
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