| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| ·研究目的和意义 | 第13页 |
| ·PCV 研究进展 | 第13-22页 |
| ·PCV 病原学研究进展 | 第13-17页 |
| ·致病机理研究进展 | 第17-19页 |
| ·病毒感染及复制研究进展 | 第19-22页 |
| ·PCV2 检测方法研究进展 | 第22-24页 |
| ·血清学检测方法 | 第22-23页 |
| ·病原学检测方法 | 第23-24页 |
| ·研究内容和方法 | 第24-25页 |
| 第二章 猪圆环病毒2 型毒株克隆鉴定及序列分析 | 第25-32页 |
| ·材料方法 | 第25-28页 |
| ·病料 | 第25页 |
| ·主要试剂、质粒和菌种 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第26页 |
| ·病毒DNA 的抽提 | 第26-27页 |
| ·PCR 扩增相应的基因片段PCR 反应体系 | 第27页 |
| ·目的DNA 片段的回收与连接 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备、转化、阳性克隆菌落挑选和鉴定 | 第27-28页 |
| ·目的DNA 片段的核苷酸测序和序列分析 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-30页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第28页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第28页 |
| ·序列鉴定与序列分析 | 第28-30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 感染性克隆的构建 | 第32-41页 |
| ·材料和方法 | 第32-36页 |
| ·l 毒株和细胞 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·引物设计 | 第33-34页 |
| ·病毒DNA 的提取 | 第34页 |
| ·PCV2 全序列的扩增 | 第34页 |
| ·含单、双拷贝PCV2 基因组的重组质粒的构建 | 第34页 |
| ·重组质粒转染及间接免疫荧光检测 | 第34-35页 |
| ·病毒体外转录鉴定 | 第35页 |
| ·p-PCV2 和p-2PCV2 免疫小鼠试验 | 第35-36页 |
| ·电镜观察 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-39页 |
| ·全基因组扩增 | 第36页 |
| ·重组质粒p-PCV2，p-2PCV2 的鉴定 | 第36页 |
| ·间接免疫荧光检测结果 | 第36-37页 |
| ·病毒基因的PCR 检测以及Cap 蛋白的基因转录的RT-PCR 鉴定 | 第37-38页 |
| ·免疫小鼠体内抗原检测 | 第38页 |
| ·免疫小鼠抗体检测 | 第38-39页 |
| ·电镜结果 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 EGFP 标记的添加与增加自身表位克隆的构建 | 第41-49页 |
| ·材料和方法 | 第41-45页 |
| ·l 质粒载体和细胞 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·PCV2 全序列的扩增 | 第43页 |
| ·EGFP 标记的融合 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的构建及阳性克隆的筛选 | 第44页 |
| ·EGFP 稳定性鉴定 | 第44页 |
| ·PPGP 转染及荧光显微镜观察 | 第44页 |
| ·免疫荧光试验 | 第44页 |
| ·病毒DNA PCR 检测及Cap 基因转录的RT-PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-48页 |
| ·全基因组扩增 | 第45页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| ·荧光显微镜观察及间接免疫荧光试验结果 | 第46-47页 |
| ·插入EGFP 基因稳定性鉴定 | 第47页 |
| ·PCR 及RT-PCR 鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 cap 蛋白肽段活性分析及抗体检测 ELISA 方法建 立 | 第49-60页 |
| ·材料与方法 | 第50-53页 |
| ·毒株、菌种、试剂、血清样品 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·引物设计及目的基因的扩增 | 第50-51页 |
| ·表达质粒的构建及阳性克隆的筛选 | 第51页 |
| ·目的基因的诱导表达及可溶性分析 | 第51-52页 |
| ·可溶性蛋白的纯化 | 第52页 |
| ·Western blotting 鉴定表达产物 | 第52页 |
| ·rhcap-ELISA 方法的建立和评价 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-55页 |
| ·目的基因扩增及重组质粒的鉴定 | 第53-54页 |
| ·pcv2 融合蛋白的诱导表达、分析、纯化和Western blotting 鉴定 | 第54-55页 |
| ·评价RHCAP-ELISA 方法 | 第55-58页 |
| ·rhcap 抗原、血清和酶标记抗体工作浓度的滴定 | 第55页 |
| ·临界值的确定 | 第55-56页 |
| ·rhcap-ELISA 方法的特异性 | 第56页 |
| ·重复试验 | 第56-57页 |
| ·rhcap-ELISA 与商品化的PCV2-Ab-Kit 的比较试验 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 附录1 重组质粒P-PCV2、P-2PCV2 的构建 | 第69-70页 |
| 附录2 带有EGFP 标记的重组质粒的构建 | 第70-71页 |
| 附录3 插入PCV2 自身表位的重组质粒的构建 | 第71-72页 |
| 附录4 登入 Gene Bank 中的序列 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77-78页 |
| 导师简介 | 第78页 |
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