致谢 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-9页 |
1 文献综述 | 第9-15页 |
·Exendin-4 简介 | 第9页 |
·Exendin-4 的发现 | 第9-10页 |
·Exendin-4 空间结构及与受体结合 | 第10-11页 |
·Exendin-4 基因表达特点 | 第11-12页 |
·Exendin-4 的信号传导途径及作用机制 | 第12-13页 |
·Exendin-4 的生物学效应 | 第13-14页 |
·Exendin-4 应用与研究现状 | 第14-15页 |
2 引言 | 第15-16页 |
3 材料与方法 | 第16-22页 |
·材料、试剂与仪器 | 第16页 |
·菌株与载体等 | 第16页 |
·酶和其它试剂 | 第16页 |
·主要仪器 | 第16页 |
·实验动物 | 第16页 |
·实验方法 | 第16-22页 |
·表达载体的构建 | 第16-17页 |
·人工合成Exendin-4 基因 | 第16-17页 |
·表达载体pRSET B-Exendin-4 的构建 | 第17页 |
·在Exendin-4 基因两端加酶切位点 | 第17页 |
·克隆载体pMD19-T-Exendin-4 的构建 | 第17页 |
·表达载体pET-32a(+)-Exendin-4 的构建 | 第17页 |
·Exendin-4 表达 | 第17-18页 |
·纯化融合蛋白Trx-Exendin-4 | 第18页 |
·透析融合蛋白Trx-Exendin-4 | 第18-19页 |
·肠激酶酶切融合蛋白Trx-Exendin-4 | 第19页 |
·酶切反应温度 | 第19页 |
·肠激酶的用量 | 第19页 |
·纯化Exendin-4 | 第19页 |
·一步法纯化Exendin-4 | 第19-20页 |
·生物活性测定 | 第20-22页 |
·急性降糖作用 | 第20页 |
·降糖持续时间 | 第20页 |
·长期降糖作用 | 第20-21页 |
·对糖化血红蛋白的影响 | 第21页 |
·对血脂的影响 | 第21页 |
·对体重和采食量的影响 | 第21-22页 |
4 结果与分析 | 第22-39页 |
·基因改造 | 第22页 |
·Exendin-4 表达载体的构建 | 第22-27页 |
·表达载体pRSET B-Exendin-4 构建策略 | 第22-23页 |
·表达载体pRSET B-Exendin-4 的构建 | 第23-24页 |
·表达载体pET-32a-Exendin-4 构建策略 | 第24-25页 |
·克隆载体pMD19-T-Exendin-4 的构建 | 第25-26页 |
·表达载体pET-32a(+)- Exendin-4 的构建 | 第26-27页 |
·Exendin-4 表达 | 第27-29页 |
·表达载体pRSET B-Exendin-4 的表达 | 第27-28页 |
·表达载体pET-32a-Exendin-4 的表达 | 第28-29页 |
·纯化融合蛋白Trx-Exendin-4 | 第29-30页 |
·透析融合蛋白Trx-Exendin-4 | 第30页 |
·肠激酶酶切融合蛋白Trx-Exendin-4 | 第30-33页 |
·酶切反应温度 | 第30-32页 |
·肠激酶用量 | 第32-33页 |
·纯化Exendin-4 | 第33页 |
·一步法纯化Exendin-4 | 第33-35页 |
·生物活性测定 | 第35-39页 |
·急性降糖作用 | 第35-36页 |
·降糖持续时间 | 第36页 |
·长期降糖作用 | 第36-37页 |
·对糖化血红蛋白的影响 | 第37页 |
·对血脂的影响 | 第37-38页 |
·对体重和采食量的影响 | 第38-39页 |
5 结论与讨论 | 第39-42页 |
·结论 | 第39页 |
·讨论 | 第39-42页 |
·非融合表达载体pRSET B-Exendin-4 未表达的原因 | 第39-41页 |
·Exendin-4 的生物活性 | 第41-42页 |
参考文献 | 第42-47页 |
英文摘要 | 第47页 |