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猪链球菌与宿主细胞的相互作用以及毒力相关蛋白HPO197的功能研究
 
     论文目录
 
摘要第1-11页
Abstract第11-14页
缩略词表第14-17页
第1章 文献综述第17-32页
   ·猪链球菌病第17页
   ·猪链球菌毒力相关因子第17-23页
     ·荚膜(CPS)第18-19页
     ·细胞壁第19页
     ·生物被膜(Biofilm)第19-20页
     ·表面蛋白第20-22页
     ·分泌蛋白第22-23页
   ·猪链球菌毒力调控机制第23-25页
     ·单元系统第23-24页
     ·双元系统第24-25页
   ·猪链球菌的致病机理第25-29页
     ·猪链球菌在上呼吸道的定植与入侵第25-26页
     ·猪链球菌在宿主血液循环的存活与扩散第26-27页
     ·猪链球菌致败血性休克的机制第27-28页
     ·猪链球菌致脑膜炎的机制第28-29页
   ·蛋白质相互作用技术手段第29-31页
     ·双杂交系统第30页
     ·亲和纯化第30页
     ·Blue native PAGE第30-31页
     ·蛋白质微阵列芯片第31页
   ·本研究的内容与目标第31-32页
第2章 猪链球菌2型新型保护性抗原HP0197与宿主细胞相互作用的研究第32-52页
   ·前言第32页
   ·材料与方法第32-41页
     ·主要试剂第32-34页
     ·主要缓冲液第34页
     ·主要仪器设备第34-35页
     ·菌株的培养条件及菌株的构建第35-36页
     ·生长曲线的测定第36页
     ·细胞系及其培养条件第36-37页
     ·蛋白质的重组表达及纯化第37-38页
     ·蛋白质的定量第38页
     ·间接免疫荧光分析第38-39页
     ·流式细胞技术分析第39页
     ·鉴定HP0197在猪脑组织中的受体分子第39-40页
     ·重组蛋白HP0197与葡萄糖的结合分析第40页
     ·凝胶阻滞分析CcpA的DNA结合活性第40-41页
     ·统计学分析第41页
   ·结果与分析第41-48页
     ·HP0197可以粘附到Hep-2细胞表面第41-42页
     ·肝素分子可以抑制HP0197与Hep-2细胞的相互作用第42-44页
     ·HP097可以与宿主脑组织中非蛋白质组份相互作用第44-45页
     ·HP0197可以与葡萄糖分子结合第45-47页
     ·hp0197基因的缺失可以通过改变HPr的磷酸化而进一步影响CcpA的功能第47-48页
   ·讨论第48-52页
     ·HP0197是一个未知功能的SS2表面毒力相关蛋白第48-49页
     ·HP0197是一个新型的细菌表面糖结合蛋白第49页
     ·HP0197通过与肝素分子结合可能参与S suis的致病过程第49-50页
     ·HP0197可能协助S suis获得更多的葡萄糖第50页
     ·HP0197能够参与S suis的能量代谢第50-51页
     ·HP0197在S suis与宿主相互作用过程中发扮演着重要的角色第51-52页
第3章 大尺度鉴定病原菌表面蛋白与宿主细胞表面分子之间的相互作用第52-83页
   ·前言第52-53页
   ·材料与方法第53-59页
     ·主要试剂第53页
     ·主要缓冲液第53-54页
     ·主要仪器设备第54页
     ·菌株与培养条件第54页
     ·细胞系及其培养条件第54页
     ·生物素化的Hep-2细胞表面分子的制备第54页
     ·Hep-2细胞表面分子生物素化的检测第54-55页
     ·生物素化分子的固定第55页
     ·证实生物素化蛋白与树脂的结合第55页
     ·SS2表面蛋白的制备第55页
     ·从SS2表面蛋白中捕获SIPs第55-56页
     ·胰酶水解第56页
     ·HPLC-MS/MS分析及蛋白质的鉴定第56页
     ·重组,表达以及纯化被捕获的SS2蛋白第56-57页
     ·蛋白质的定量第57页
     ·多克隆抗体的制备第57-58页
     ·流式细胞技术分析第58页
     ·间接免疫荧光分析第58页
     ·竞争性抑制分析第58-59页
     ·检测HAM1抗体的特异性第59页
     ·统计学分析第59页
   ·结果与分析第59-78页
     ·证实Hep-2细胞表面分子的生物素化以及生物素化分子与树脂的结合第59-61页
     ·质谱鉴定SS2的SIPs第61-75页
     ·SIPs在SS2的表面定位第75-76页
     ·证实SIPs与Hep-2细胞的相互作用第76页
     ·Enolase、DnaK以及HAM1是SS2主要的粘附蛋白第76-78页
   ·讨论第78-83页
     ·鉴定病原菌SIPs是研究病原菌与宿主相互作用的重要手段第78页
     ·ACSP技术能够很好的鉴定细菌与宿主细胞胞外分子之间的相互作用第78-79页
     ·Enolase、DnaK与HAM1参与SS2的致病过程第79-81页
     ·没有抑制作用的蛋白也可能参与SS2的致病过程第81页
     ·未被选择的蛋白也可能参与SS2的致病过程第81-82页
     ·ACSP技术是一个有价值的研究细菌与宿主相互作用的工具第82-83页
第4章 猪链球菌免疫原性蛋白HP0272的保护力评价第83-94页
   ·前言第83页
   ·材料与方法第83-88页
     ·主要试剂第83-84页
     ·主要缓冲液第84页
     ·主要仪器设备第84页
     ·菌株与培养条件第84页
     ·重组蛋白的质谱鉴定第84-85页
     ·蛋白质的定量第85页
     ·实验动物第85页
     ·小鼠的免疫第85页
     ·小鼠的人工感染第85页
     ·抗体滴度的检测第85-86页
     ·qPCR检测hp0272在体内和体外时的表达第86-88页
     ·PCR检测hp0272在各菌株中的分布第88页
     ·统计学分析第88页
   ·结果与分析第88-92页
     ·重组蛋白HP0272的表达第88-89页
     ·HP0272是一个C端锚定的S.suis表面蛋白第89-90页
     ·小鼠的免疫反应第90-91页
     ·小鼠的人工感染第91页
     ·hp0272基因在S.suis分离菌中的分布第91-92页
     ·HP0272是一个体内诱导抗原第92页
   ·讨论第92-94页
     ·HP0272是一个有价值的疫苗候选抗原第92-93页
     ·佐剂对疫苗效果的影响第93页
     ·HP0272分子量偏大的原因第93页
     ·HP0272可能在致病过程中发挥着重要作用第93-94页
第5章 结论第94-95页
参考文献第95-117页
致谢第117-119页
附录第119-120页

 
 
论文编号BS12422,这篇论文共120
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