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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--重组中东呼吸综合征病毒刺突蛋白S1亚基及其编码DNA接种小鼠的抗血清水平研究
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重组中东呼吸综合征病毒刺突蛋白S1亚基及其编码DNA接种小鼠的抗血清水平研究
 
     论文目录
 
摘要第2-3页
abstract第3页
引言第6-8页
1 实验材料第8-13页
    1.1 质粒和菌株第8页
    1.2 细胞株第8-9页
    1.3 实验小鼠第9页
    1.4 主要试剂第9页
    1.5 主要仪器设备第9-10页
    1.6 主要溶液配方第10-13页
        1.6.1 大肠杆菌(E.coli)培养基的配制第10页
        1.6.2 质粒DNA提取(大量法)相关溶液的配制第10页
        1.6.3 DNA琼脂糖凝胶电泳缓冲液及1%琼脂糖凝胶的配制第10页
        1.6.4 细胞冻存液及细胞裂解液的配制第10-11页
        1.6.5 SDS-PAGE配置蛋白胶及相关缓冲液的配制第11页
        1.6.6 Westernblotting相关缓冲液的配制第11-12页
        1.6.7 蛋白纯化相关缓冲液配制第12页
        1.6.8 常用缓冲液的配制第12-13页
2 实验方法第13-26页
    2.1 基因表达载体的构建第13-20页
        2.1.1 蛋白序列的密码子优化第13页
        2.1.2 引物设计第13页
        2.1.3 引物稀释第13页
        2.1.4 PCR扩增第13-14页
        2.1.5 PCR产物回收第14页
        2.1.6 S1目的基因与载体的双酶切消化第14-16页
        2.1.7 双酶切产物纯化回收第16页
        2.1.8 目的基因与pEAK13CD5LTEVIgGhFc真核表达载体的连接第16-17页
        2.1.9 重组质粒的转化第17页
        2.1.10 重组质粒DNA的小量提取与鉴定第17-19页
        2.1.11 重组质粒DNA的大量提取第19-20页
        2.1.12 重组质粒DNA酶切线性化及纯化回收第20页
    2.2 细胞实验第20-24页
        2.2.1 HEK293T和HEK293E细胞的复苏第20-21页
        2.2.2 HEK293T和HEK293E细胞的传代第21页
        2.2.3 pEAK13CD5LS1TEVIgGFc表达质粒瞬时转染HEK293T细胞第21页
        2.2.4 稳定表达细胞株的构建第21-22页
        2.2.5 细胞裂解第22页
        2.2.6 Westernblotting检测第22-23页
        2.2.7 细胞冻存第23页
        2.2.8 蛋白纯化第23-24页
        2.2.9 BCA法测定蛋白质浓度第24页
    2.3 动物实验第24-25页
    2.4 免疫实验第25-26页
        2.4.1 Westernblotting验证接种小鼠是否产生抗S1血清第25页
        2.4.2 ELISA检测抗S1血清滴度第25-26页
3 实验结果第26-44页
    3.1 MERS-CoV刺突蛋白(S)编码基因序列的密码子优化第26-28页
    3.2 MERS-CoVS1亚基基因片段PCR扩增第28-29页
    3.3 pEAK13CD5LTEVIgGFc表达载体与S1基因片段的酶切纯化回收第29页
    3.4 小量提取pEAK13CD5LS1TEVIgGFc重组质粒鉴定第29-30页
    3.5 重组质粒的双酶切验证第30-31页
    3.6 重组质粒序列分析第31-36页
    3.7 大量提取pEAK13CD5LS1TEVIgGFc重组质粒鉴定第36页
    3.8 重组表达质粒瞬时转染HEK293T后的蛋白表达鉴定第36-37页
    3.9 重组质粒的酶切线性化验证第37-38页
    3.10 稳定表达细胞株的筛选鉴定第38-39页
    3.11 S1-Fc融合蛋白纯化后PAGE胶检测结果第39-40页
    3.12 Westernblotting验证抗S1血清的特异性第40-42页
    3.13 ELISA检测小鼠抗S1血清的高滴度第42-44页
4 结论第44-45页
    4.1 成功构建重组质粒pEAK13CD5LS1TEVhIgGFc第44页
    4.2 在人源HEK293E细胞中成功表达了S1-Fc融合蛋白第44页
    4.3 Westernblotting和ELISA检测到小鼠抗血清对重组S1-Fc融合蛋白具高度特异性第44-45页
5 讨论第45-47页
参考文献第47-49页
综述第49-62页
    参考文献第55-62页
附录或缩略词表第62-63页
致谢第63-64页
攻读学位期间的研究成果第64-65页

 
 
论文编号BS3837172,这篇论文共65
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