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拟南芥HyPRP蛋白AZI1在转基因烟草中的亚细胞定位及其对真菌病原体的抗性
 
     论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-12页
第一章 引言第12-19页
 1. 植物脂转移蛋白研究进展第12-14页
   ·脂转移蛋白简介第12页
   ·植物脂转移蛋白的细胞定位第12-13页
   ·LTP参与角质和蜡质形成第13页
   ·LTP的抗菌功能第13-14页
 2. 绿色荧光蛋白GFP第14-15页
   ·GFP的结构第14页
   ·GFP的应用第14-15页
 3. EARLI1亚家族基因研究进展第15页
 4. AZI1基因研究进展第15-17页
 5. pET原核表达载体和pCAMBIA植物表达载体第17页
 6. DAB和台盼蓝染色第17-18页
 7. 本研究的内容和意义第18-19页
第二章 AZI1-GFP融合表达载体的构建第19-28页
 1. 材料与方法第19-25页
   ·材料第19页
     ·植物材料和细菌菌株第19页
     ·拟南芥的培养和生长条件第19页
     ·试剂与仪器第19页
   ·方法第19-25页
     ·AZI1基因的克隆第19-21页
       ·引物的设计第20页
       ·CTAB法提取拟南芥基因组DNA第20页
       ·AZI1基因的PCR扩增第20-21页
     ·PCR产物的胶回收第21页
     ·质粒pCAMBIA1302提取第21-22页
     ·PCR产物与载体的双酶切第22页
     ·AZI1-GFP融合表达载体的构建第22-25页
       ·目的片段与pCAMBIA1302载体的连接第22页
       ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备第22-23页
       ·大肠杆菌感受态细胞的转化第23页
       ·菌落PCR和双酶切鉴定第23-25页
       ·测序第25页
       ·农杆菌LBA4404感受态细胞的制备第25页
       ·冻融法转化农杆菌感受态细胞第25页
 2. 结果第25-27页
   ·大肠杆菌菌落PCR鉴定第25-26页
   ·AZI1-GFP融合表达载体的双酶切鉴定第26页
   ·测序结果第26-27页
   ·农杆菌的菌落PCR鉴定第27页
 3. 小结第27-28页
第三章 AZI1在转基因烟草中的定位及其对灰霉菌的抗性第28-43页
 1. 材料与方法第28-35页
   ·材料与试剂第28页
   ·方法第28-35页
     ·转基因烟草的再生第28-29页
     ·转基因烟草的分子生物学鉴定第29-34页
       ·转基因烟草的PCR鉴定第29页
       ·转基因烟草的RT-PCR鉴定第29-31页
       ·转基因烟草的Southern blotting分析第31-34页
     ·HyPRP蛋白AZI1在转基因烟草中的亚细胞定位第34-35页
     ·AZI1基因对灰霉菌的抗性分析第35页
       ·DAB(3,3-二氨基联苯胺)染色第35页
       ·台盼蓝染色分析第35页
     ·灰霉菌侵染前后转基因烟草中AZI1基因的表达分析第35页
     ·转基因拷贝数对GFP表达水平的影响第35页
     ·拷贝数对转基因烟草抗性水平的影响第35页
 2. 结果第35-42页
   ·转AZI1-GFP基因烟草的获得第35-36页
   ·转基因烟草的PCR鉴定第36-37页
   ·转基因烟草的Southern印迹分析第37页
   ·AZI1蛋白的亚细胞定位第37-39页
     ·转35S::AZI1-GFP基因烟草叶片细胞中的GFP荧光观察第37-38页
     ·转35S::AZI1-GFP基因烟草根中的GFP荧光观察第38-39页
     ·不同转基因烟草根中的GFP荧光观察第39页
   ·拷贝数对AZI1-GFP表达水平的影响第39页
   ·转AZI1-GFP基因烟草对灰霉菌的抗性第39-41页
     ·DAB染色结果第40页
     ·台盼蓝染色结果第40-41页
   ·灰霉菌侵染前后转基因烟草中AZI1-GFP基因的表达分析第41页
   ·不同拷贝数对转基因烟草抗性水平的影响第41-42页
 3. 小结第42-43页
第四章 利用大肠杆菌表达AZI1重组蛋白第43-53页
 1. 材料第43-44页
   ·材料与细菌菌种第43页
   ·试剂第43页
   ·SDS-PAGE相关溶液第43-44页
   ·SDS-PAGE凝胶配方第44页
   ·Western印迹实验相关溶液第44页
 2. 方法第44-49页
   ·原核表达载体的构建第44-47页
     ·pET28a质粒DNA提取第44-45页
     ·目的片段的酶切与胶回收第45页
     ·目的片段与pET28a载体的连接第45-46页
     ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的转化第46页
     ·阳性克隆的筛选与鉴定第46-47页
       ·细菌菌落PCR鉴定第46页
       ·酶切鉴定第46-47页
     ·测序第47页
     ·用重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞第47页
   ·重组蛋白的诱导表达第47-48页
   ·重组蛋白的Western免疫印迹分析第48-49页
 3. 结果第49-52页
   ·大肠杆菌DH5a的菌落PCR鉴定第49页
   ·双酶切鉴定第49页
   ·序列测定第49-50页
   ·大肠杆菌BL21(DE3)的菌落PCR鉴定第50页
   ·目的蛋白的诱导表达第50-51页
   ·目的蛋白的Western blotting分析第51-52页
 4. 小结第52-53页
第五章 目的蛋白的纯化及抗性分析第53-60页
 1. 材料与试剂第53页
   ·菌株第53页
   ·培养基第53页
   ·试剂第53页
 2. 方法第53-55页
   ·AZI1蛋白的纯化第53-54页
     ·镍离子螯合层析纯化目的蛋白第53-54页
     ·目的蛋白的浓缩和检测第54页
   ·AZI1蛋白的活性分析第54-55页
     ·AZI1蛋白对灰霉菌的抑制作用第54页
     ·AZI1蛋白对酵母菌的抑制作用分析第54-55页
     ·酵母细胞膜通透性分析第55页
 3. 结果第55-58页
   ·AZI1蛋白的纯化结果第55-56页
   ·AZI1蛋白对灰霉菌的抑制作用第56-57页
   ·AZI1蛋白对酵母菌的抑制作用第57页
   ·酵母细胞膜通透性分析第57-58页
 小结第58-60页
结论第60-61页
 1 研究结论第60页
 2 本研究的特色和创新第60-61页
参考文献第61-67页
攻读硕士学位期间取得的学术成果第67-68页
致谢第68页

 
 
论文编号BS1962723,这篇论文共68
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