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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--恰塔努加链霉菌AdpAch的多效调控机制
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恰塔努加链霉菌AdpAch的多效调控机制
 
     论文目录
 
摘要第5-7页
Abstract第7-8页
缩略词对应表第9-14页
1. 文献综述第14-26页
    1.1 前言第14-15页
    1.2 链霉菌全局及多效性调控基因研究进展第15-20页
        1.2.1 双组份调控系统第15-17页
        1.2.2 稀有密码子识别调控--bldA第17-19页
        1.2.3 全局调控蛋白--DasR第19-20页
    1.3 链霉菌中多效调控蛋白AdpA的研究背景第20-22页
    1.4 链霉菌形态分化调控机制研究进展第22-24页
        1.4.1 bld家族基因第23-24页
        1.4.2 whi家族基因第24页
    1.5 本课题的工作基础、目的和展望第24-26页
2. AdpA_(ch)的双向调控分子机制第26-66页
    2.1 引言第26-27页
    2.2 材料第27-36页
        2.2.1 菌株第27-28页
        2.2.2 质粒载体第28-29页
        2.2.3 引物第29-34页
        2.2.4 主要仪器设备第34-35页
        2.2.5 培养基第35页
        2.2.6 常用试剂第35-36页
    2.3 方法第36-47页
        2.3.1 大肠杆菌质粒抽提第36页
        2.3.2 大肠杆菌Cosmid抽提第36-37页
        2.3.3 核酸片段割胶回收第37页
        2.3.4 链霉菌基因组提取第37-38页
        2.3.5 PCR相关技术第38-39页
        2.3.6 大肠杆菌感受态细胞的制备第39页
        2.3.7 大肠杆菌感受态细胞的转化第39-40页
        2.3.8 重组蛋白诱导表达第40页
        2.3.9 重组蛋白纯化第40-41页
        2.3.10 恰塔努加链霉菌孢子收取及保存第41页
        2.3.11 EMSA实验流程第41-42页
        2.3.12 DNase I Footprinting第42-43页
        2.3.13 DNA affinity实验流程第43-44页
        2.3.14 恰塔努加链霉菌RNA提取第44页
        2.3.15 荧光定量PCR第44-45页
        2.3.16 XylE酶活测定第45-46页
        2.3.17 抑菌圈实验第46页
        2.3.18 恰塔努加链霉菌摇瓶发酵及抗生素测定第46-47页
    2.4 结果第47-62页
        2.4.1 DNA affinity 捕获结合在scnRⅠ-scnRⅡ的间隔区蛋白第47-49页
        2.4.2 蛋白表达及EMSA验证第49-52页
        2.4.3 AdpA_(ch)与scnRⅠ-scnRⅡ间隔区序列结合的特异性验证第52-53页
        2.4.4 AdpA_(ch)不调控纳他霉素合成基因第53-55页
        2.4.5 AdpA_(ch)对scnRⅠ和scnRⅡ的转录活性分析第55-56页
        2.4.6 AdpA_(ch)在scnRⅠ-scnRⅡ的间隔区结合序列分析第56-58页
        2.4.7 结合位点确认及点突变验证结合序列保守性第58-60页
        2.4.8 xylE报告基因分析各结合位点的功能第60-62页
        2.4.9 各结合位点对纳他霉素产量的影响第62页
    2.5 小结与讨论第62-66页
3. AdpA_(ch)的自反馈机制研究第66-80页
    3.1 引言第66页
    3.2 材料第66-69页
        3.2.1 菌株第66-67页
        3.2.2 质粒载体第67-68页
        3.2.3 引物第68-69页
        3.2.4 主要仪器设备第69页
        3.2.5 培养基第69页
    3.3 方法第69页
    3.4 结果第69-78页
        3.4.1 adpA_(ch)缺失对自身转录影响分析第69-70页
        3.4.2 EMSA验证AdpA_(ch)的自调控机制第70-71页
        3.4.3 AdpA_(ch)在自身启动子上的结合序列分析第71-72页
        3.4.4 AdpA_(ch)在自身启动子上的结合序列保守性分析第72-73页
        3.4.5 竞争性实验分析两结合位点结合能力强弱第73-74页
        3.4.6 xylE报告基因分析两结合位点对启动子活性影响第74-75页
        3.4.7 结合位点序列突变分析对纳他霉素产量的影响第75-76页
        3.4.8 高产菌株构建第76-78页
    3.5 小结与讨论第78-80页
4. AdpA_(ch)与WblA_(ch)协同调控形态分化与生物合成的分子机制第80-102页
    4.1 引言第80页
    4.2 材料第80-83页
        4.2.1 菌株第80-81页
        4.2.2 质粒载体第81-82页
        4.2.3 引物第82-83页
        4.2.4 主要仪器设备第83页
        4.2.5 培养基第83页
    4.3 方法第83-86页
        4.3.1 PCR-targeting基因敲除关键技术第84-85页
        4.3.2 Souther杂交第85-86页
    4.4 结果第86-99页
        4.4.1 Microarray分析AdpA_(ch)对恰塔努加链霉菌的全局性影响第86-88页
        4.4.2 AdpA_(ch)对形态分化相关基因—wblA_(ch)转录水平影响第88-90页
        4.4.3 AdpA_(ch)对wblA_(ch)调控方式分析第90-91页
        4.4.4 AdpA_(ch)在wblA_(ch)启动子上结合靶序列确定第91-92页
        4.4.5 AdpA_(ch)在wblA_(ch)启动子上结合序列的保守性验证第92页
        4.4.6 wblA_(ch)敲除株的构建及验证第92-94页
        4.4.7 wblA_(ch)缺失对形态发育影响分析第94-95页
        4.4.8 wblA_(ch)影响形态分化机制研究第95-96页
        4.4.9 wblA_(ch)在纳他霉素合成过程中的作用第96-98页
        4.4.10 wblA_(ch)缺失对scnRⅠ和scnRⅡ转录水平分析第98-99页
        4.4.11 wblA_(ch)对自身转录影响第99页
    4.5 小结与讨论第99-102页
5. 研究成果与展望第102-103页
参考文献第103-113页
附录第113-116页
攻读博士学位期间的主要研究成果第116-117页
致谢第117页

 
 
论文编号BS3264423,这篇论文共117
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