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(木奈)均一化全长cDNA文库的构建及果实褐变相关基因的分离与表达分析
 
     论文目录
 
摘要第1-14页
Abstract第14-18页
缩略词第18-19页
第一章 文献综述第19-30页
 1 木奈果实褐变机制的研究进展第19-20页
   ·木奈果实褐变症状及定义第19-20页
   ·木奈果实褐变生理及分子研究进展第20页
 2 农产品酶促褐变机制的研究进展第20-23页
   ·褐变发生的条件第20-22页
     ·底物(酚类物质)第20-21页
     ·果实褐变发生的相关酶类第21-22页
     ·氧第22页
   ·农产品酶促褐变的基因调控研究进展第22-23页
 3 影响果实酶促褐变的因素第23-27页
   ·采前因素第23-24页
     ·果实大小与成熟度第24页
     ·栽植条件与树体营养第24页
   ·采后因素第24-27页
     ·机械损伤第24-25页
     ·冷害第25页
     ·气体伤害第25-26页
     ·乙烯第26-27页
     ·光线第27页
 4 本研究采用的均一化全长 cDNA 文库构建策略第27-29页
   ·均一化全长 cDNA 文库构建的技术流程第27-28页
   ·均一化全长 cDNA 文库在分离植物基因中的应用第28-29页
 5 本试验研究目的及意义第29-30页
第二章 木奈褐变果实均一化全长 cDNA 文库的构建及随机 EST 序列初步分析第30-40页
 1 材料与方法第30-32页
   ·植物材料与主要试剂第30页
   ·方法第30-32页
     ·木奈褐变果肉总 RNA 的提取第30页
     ·cDNA 第一链合成和 LD-PCR 扩增第30-31页
     ·cDNA 进行均一化处理第31页
     ·均一化全长 cDNA 的纯化与回收第31页
     ·cDNA 与 pBluescript Ⅱ质粒连接、转化、克隆和测序第31-32页
     ·序列测定及分析第32页
 2 结果与分析第32-37页
   ·总 RNA 的提取第32页
   ·双链 cDNA 的合成与 LD-PCR 扩增第32-33页
   ·均一化处理效果检测第33-34页
   ·cDNA 文库的质量评价第34页
   ·cDNA 文库测序结果分析第34-37页
     ·ESTs 长度及其分析第34页
     ·ESTs 序列分析与功能注释第34-37页
 3 讨论第37-40页
   ·cDNA 文库构建技术改进第37-38页
   ·cDNA 文库中 ESTs 序列分析第38-40页
第三章 木奈果实花青素合成酶基因(PsANS)和苯丙氨酸解氨酶基因(PsPAL)的分离与表达分析第40-54页
 1 材料与方法第41-43页
   ·植物材料与处理第41页
   ·试验方法第41-43页
     ·PsANS 基因和 PsPAL 基因的分离与序列分析第41-42页
     ·PsANS 基因和 PsPAL 基因组 DNA 序列的扩增第42页
     ·PAL 活性测定第42页
     ·PsANS 原核表达载体构建及在大肠杆菌 BL21 菌株中的表达第42-43页
     ·PsPAL 基因在木奈果实不同发育时期和采后果实在生物和非生物胁迫处理下的表达分析第43页
 2 结果与分析第43-50页
   ·PsANS 和 PsPAL 基因 cDNA 和 DNA 序列的获得与分析第43-47页
   ·PAL 活性变化第47-48页
   ·PsANS 的原核表达分析第48-49页
   ·PsPAL 在木奈果实不同生长发育时期的表达模式分析第49页
   ·PsPAL 在木奈果实采后各种胁迫处理下的表达模式分析第49-50页
 3 讨论第50-54页
   ·PsANS 基因的克隆与序列分析第50-51页
   ·PsPAL 基因的克隆及序列分析第51-52页
   ·PsPAL 基因的表达模式分析第52-54页
第四章 三个膨胀素基因在木奈果实生长发育及采后各种胁迫下的表达分析第54-70页
 1 材料与方法第55-57页
   ·植物材料与方法第55页
   ·试验方法第55-57页
     ·3 个膨胀素基因的分离与序列分析第55-56页
     ·3 个膨胀素基因组 DNA 序列的扩增第56页
     ·3 个膨胀素基因启动子的分离与序列分析第56-57页
     ·3 个膨胀素基因在木奈叶片和果实中的表达模式分析第57页
     ·3 个膨胀素基因在木奈果实不同生长发育时期和采后各种生物胁迫和非生物胁迫下的表达分析第57页
 2 结果与分析第57-67页
   ·3 个膨胀素基因的分离与序列分析第57-61页
   ·3 个膨胀素基因基因组序列分析第61页
   ·3 个膨胀素基因启动子序列克隆与分析第61-62页
   ·3 个膨胀素基因在木奈叶片和果实中的表达模式分析第62-63页
   ·3 个膨胀素基因在木奈果实不同生长发育时期的表达分析第63页
   ·3 个膨胀素基因在木奈果实机械损伤褐变过程中的表达模式分析第63-65页
   ·3 个膨胀素基因在木奈果实采后各种非生物胁迫和乙烯处理下的表达模式分析第65-67页
 3 讨论第67-70页
   ·木奈膨胀素编码一个多基因家族第67页
   ·木奈PsEXP 基因的内含子结构分析第67-68页
   ·木奈PsEXP 基因的表达模式分析第68页
   ·木奈PsEXP 基因的表达可能受各种因素的调控第68-70页
第五章 木奈果实 NAC 转录因子的分离与表达分析第70-86页
 1 材料与方法第73-76页
   ·植物材料与处理第73页
   ·试验方法第73-76页
     ·NAC 基因的分离与序列分析第73-74页
     ·载体构建第74-75页
     ·亚细胞定位分析第75页
     ·瞬间表达分析第75页
     ·转录激活活性分析第75页
     ·PsNAC 基因启动子的分离与序列分析第75页
     ·PsNAC 基因表达模式分析第75-76页
 2 结果与分析第76-83页
   ·木奈NAC 基因全长 cDNA 的分离与序列分析第76页
   ·木奈NAC 基因推导的蛋白结构域及系统进化分析第76-79页
   ·木奈PsNAC 与 NAC 识别元件 NACRS 的瞬间表达分析第79页
   ·木奈PsNAC 的亚细胞定位分析第79页
   ·木奈PsNAC 在酵母细胞中的转录激活活性分析第79-80页
   ·木奈PsNAC 基因启动子序列克隆与分析第80-81页
   ·PsNAC 基因在木奈果实采后的表达模式分析第81-83页
     ·PsNAC 基因在木奈褐变果和未褐变果中以及机械损伤后的表达模式第81-82页
     ·PsNAC 基因在木奈采后各种非生物胁迫和乙烯处理下的表达模式分析第82-83页
 3 讨论第83-86页
   ·PsNAC 蛋白的结构特征分析第83-84页
   ·PsNAC 基因可能与木奈果实衰老相关,在褐变过程中发挥着作用第84-86页
第六章 木奈果实 WRKY 类转录因子的分离与表达分析第86-100页
 1 材料与方法第89-91页
   ·植物材料与处理第89页
   ·试验方法第89-91页
     ·WRKY 基因的分离与序列分析第89-90页
     ·载体构建第90页
     ·亚细胞定位分析第90页
     ·瞬间表达分析第90页
     ·转录激活活性分析第90-91页
     ·木奈WRKY 基因启动子的分离与序列分析第91页
     ·木奈WRKY 基因表达模式分析第91页
 2 结果与分析第91-97页
   ·木奈WRKY 基因全长 cDNA 的分离与序列分析第91页
   ·木奈WRKY 基因系统进化分析第91-94页
   ·木奈PsWRKY 与 W 盒特异性结合分析第94页
   ·木奈PsWRKY 的亚细胞定位分析第94-95页
   ·木奈PsWRKY 的在酵母细胞中的转录激活活性分析第95页
   ·木奈PsWRKY 基因启动子序列克隆与分析第95-96页
   ·PsWRKY 基因在木奈果实采后的表达模式分析第96-97页
     ·PsWRKY 基因在木奈褐变果和未褐变果中以及机械损伤后的表达模式第96-97页
     ·PsWRKY 基因在木奈采后各种非生物胁迫和乙烯处理下的表达模式分析第97页
 3 讨论第97-100页
   ·首次从木奈物种中分离了 WRKY 转录因子第97-98页
   ·WRKY 类转录因子参与调控植物植物生长发育及次生代谢途径第98页
   ·WRKY 类转录因子参与植物非生物胁迫第98-100页
第七章 木奈生长发育过程中和受机械损伤后 PPO 基因的表达第100-106页
 1 材料与方法第100-101页
   ·植物材料与处理第100页
   ·试验方法第100-101页
     ·木奈成熟叶片均一化全长 cDNA 文库构建第100页
     ·PPO 基因的筛选与序列分析第100页
     ·PPO 基因在生长发育和受机械损伤后的表达模式分析第100-101页
     ·PPO 活性的测定第101页
 2 结果与分析第101-104页
   ·PsPP02 基因的分离与序列分析第101-103页
   ·木奈不同的生长发育时期 PPO 基因的表达第103页
   ·木奈成熟果实受机械损伤后 PPO 基因的表达和 PPO 酶活性的变化第103-104页
 3 讨论第104-106页
第八章 结论与展望第106-108页
参考文献第108-129页
附录第129-140页
 附录 1 木奈苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因 cDNA 全长序列及推定的氨基酸序列第129-131页
 附录 2 木奈PsEXP1 基因 cDNA 全长序列及推定的氨基酸序列以及启动子序列和内含子序列第131-133页
   ·木奈PsEXP1 基因 cDNA 全长序列及推定的氨基酸序列第131-132页
   ·木奈PsEXP1 基因启动子序列第132页
   ·木奈PsEXP1 基因内含子序列第132-133页
 附录 3 木奈PsEXP2 基因 cDNA 全长序列及推定的氨基酸序列以及启动子序列和内含子序列第133-135页
   ·木奈PsEXP2 基因 cDNA 全长序列及推定的氨基酸序列第133-134页
   ·木奈PsEXP2 基因启动子序列第134页
   ·木奈PsEXP2 基因内含子序列第134-135页
 附录4 木奈PsEXP3基因cDNA全长序列及推定的氨基酸序列以及启动子序列和内含子序列第135-137页
   ·木奈PsEXP3 基因 cDNA 全长序列及推定的氨基酸序列第135-136页
   ·木奈PsEXP3 基因启动子序列第136页
   ·木奈PsEXP3 基因内含子序列第136-137页
 附录 5 木奈PsNAC 基因 cDNA 全长序列及推定的氨基酸序列以及启动子序列第137-139页
   ·木奈PsNAC 基因 cDNA 全长序列及推定的氨基酸序列第137-138页
   ·木奈PsNAC 基因启动子序列第138-139页
 附录 6 木奈PsWRKY 基因启动子序列第139-140页
博士就读期间发表论文情况第140-141页
致谢第141页

 
 
论文编号BS23174,这篇论文共141
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