| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 T. reesei RUT C30及其纤维素酶系 | 第10-11页 |
| 1.2 T. reesei表达系统的研究 | 第11-13页 |
| 1.3 T. reesei纤维素酶的表达调控的研究 | 第13页 |
| 1.4 磷酸化蛋白组学 | 第13-14页 |
| 1.5 磷酸化蛋白质组学分析和定量技术的研究 | 第14-18页 |
| 1.5.1 磷酸化肽的富集 | 第14-15页 |
| 1.5.2 磷酸化肽的鉴定 | 第15-16页 |
| 1.5.3 磷酸化肽的定量 | 第16-18页 |
| 1.6 生物信息学技术 | 第18-19页 |
| 第2章 质谱非标记定量分析调控里氏木霉分泌纤维素酶相关蛋白 | 第19-30页 |
| 引言 | 第19页 |
| 2.1 材料与方法 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.3 使用仪器 | 第20页 |
| 2.1.4 菌株的培养 | 第20-21页 |
| 2.1.5 不同组别的总蛋白提取 | 第21页 |
| 2.1.6 蛋白质的定量—Brodford法 | 第21页 |
| 2.1.7 蛋白质的酶切 | 第21-22页 |
| 2.1.8 磷酸化肽段的富集 | 第22页 |
| 2.1.9 LC-MS/MS上样 | 第22-23页 |
| 2.1.10 质谱信号处理和肽段鉴定 | 第23页 |
| 2.1.11 蛋白质的定量 | 第23页 |
| 2.2 结果与分析 | 第23-28页 |
| 2.2.1 数据的重复性分析 | 第23-24页 |
| 2.2.2 差异蛋白的定量结果 | 第24页 |
| 2.2.3 差异蛋白的功能分析 | 第24-28页 |
| 2.2.3.1 GO分析 | 第24-25页 |
| 2.2.3.2 KEGG分析 | 第25-28页 |
| 2.3 讨论 | 第28-30页 |
| 第3章二甲基标记定量分析调控里氏木霉分泌纤维素酶相关蛋白 | 第30-46页 |
| 引言 | 第30页 |
| 3.1 材料与方法 | 第30-39页 |
| 3.1.1 菌株 | 第30-31页 |
| 3.1.2 培养基 | 第31页 |
| 3.1.3 仪器 | 第31页 |
| 3.1.4 T. reesei的培养 | 第31页 |
| 3.1.5 差异磷酸化蛋白的筛选 | 第31-32页 |
| 3.1.5.1 蛋白质的提取 | 第31页 |
| 3.1.5.2 蛋白质的定量—Brodford法 | 第31页 |
| 3.1.5.3 蛋白质的酶切 | 第31-32页 |
| 3.1.5.4 磷酸化肽段的富集 | 第32页 |
| 3.1.5.5 磷酸化肽段的二甲基标记 | 第32页 |
| 3.1.5.6 LC-MS/MS上样 | 第32页 |
| 3.1.5.7 差异磷酸化蛋白的定量 | 第32页 |
| 3.1.6 GTP表达载体的构建 | 第32-39页 |
| 3.1.6.1 RNA的提取 | 第32-33页 |
| 3.1.6.2 cDNA文库的构建 | 第33-35页 |
| 3.1.6.4 里氏木霉的转化 | 第35-37页 |
| 3.1.6.5 滤纸酶活的测定 | 第37页 |
| 3.1.6.6 CMC酶活的测定 | 第37-38页 |
| 3.1.6.7 荧光定量PCR | 第38-39页 |
| 3.2 结果与分析 | 第39-44页 |
| 3.2.1 磷酸化蛋白的定量结果 | 第39-41页 |
| 3.2.2 过表达载体的构建和鉴定 | 第41页 |
| 3.2.3 过表达菌株的构建和鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.4 qPCR分析重组菌株中GTP基因的相对表达量 | 第42-43页 |
| 3.2.5 重组菌株中的滤纸酶活和CMC酶活的测定 | 第43-44页 |
| 3.3 讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 附录 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第60页 |
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