| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略语 | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-29页 |
| 1 植物病原细菌harpin蛋白 | 第13-19页 |
| 1.1 hrp和hpa基因 | 第13-14页 |
| 1.2 Harpin蛋白概述 | 第14-16页 |
| 1.3 Harpin蛋白激发的免疫反应(PTI) | 第16页 |
| 1.4 Hpa1_(Xoo)及其截短多肽结构功能研究 | 第16-19页 |
| 2 Harpin蛋白效应及应用研究 | 第19-22页 |
| 2.1 促进植物生长发育 | 第19-20页 |
| 2.2 诱导植物抗病性 | 第20页 |
| 2.3 诱导植物抗旱性 | 第20-21页 |
| 2.4 转基因研究应用 | 第21-22页 |
| 3 植物防卫信号通路途径 | 第22-26页 |
| 3.1 水杨酸信号途径 | 第22页 |
| 3.2 茉莉酸信号途径 | 第22-24页 |
| 3.3 乙烯信号途径 | 第24-25页 |
| 3.4 脱落酸信号途径 | 第25-26页 |
| 3.5 钙和钙信号调节的信号途径 | 第26页 |
| 4 基因芯片研究进展 | 第26-28页 |
| 4.1 基因芯片(微阵列)概况 | 第26-27页 |
| 4.2 基因转录表达研究 | 第27-28页 |
| 5 本研究的目的意义 | 第28-29页 |
| 材料与方法 | 第29-44页 |
| 1 材料 | 第29-32页 |
| 1.1 供试植物材料 | 第29页 |
| 1.2 供试菌株及来源 | 第29页 |
| 1.3 消毒液、缓冲液、培养基、常用溶液配置 | 第29-30页 |
| 1.4 主要仪器设备和试剂 | 第30-31页 |
| 1.4.1 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 1.4.2 主要试剂 | 第31页 |
| 1.5 烟草基因芯片 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-44页 |
| 2.1 Hpa1_(Xoo)-N21蛋白活性检测 | 第32页 |
| 2.1.1 Hpa1_(Xoo)-N21多肽的合成 | 第32页 |
| 2.1.2 HR活性的测定 | 第32页 |
| 2.2 Hpa1_(Xoo)-N21多肽应用研究 | 第32-34页 |
| 2.2.1 N21多肽促生作用测定 | 第32-33页 |
| 2.2.2 N21多肽诱导抗病性测定 | 第33-34页 |
| 2.2.3 N21多肽抗旱性测定 | 第34页 |
| 2.3 转N21基因烟草植株的培养和验证 | 第34-40页 |
| 2.3.1 转N21基因烟草植株的获得 | 第34页 |
| 2.3.2 转N21基因烟草gDNA的提取及PCR检测 | 第34-37页 |
| 2.3.3 转N21基因烟草总RNA的提取、纯化及检测 | 第37-39页 |
| 2.3.4 转N21基因烟草目的基因RT-PCR分析 | 第39-40页 |
| 2.4 转基因烟草基因芯片分析 | 第40页 |
| 2.4.1 烟草植株准备 | 第40页 |
| 2.4.2 烟草叶片处理及其RNA提取及质量检测 | 第40页 |
| 2.4.3 芯片杂交分析 | 第40页 |
| 2.5 TMV胁迫下差异表达基因分析 | 第40-41页 |
| 2.5.1 接种TMV的亲本烟草和未接种TMV的亲本烟草 | 第40-41页 |
| 2.5.2 接种TMV的转N21基因烟草和未接种TMV的转N21基因烟草 | 第41页 |
| 2.5.3 接种TMV的转N21基因烟草和接种TMV的亲本烟草 | 第41页 |
| 2.6 PEG胁迫下差异表达基因分析 | 第41页 |
| 2.6.1 PEG处理的亲本烟草和未用PEG处理的亲本烟草 | 第41页 |
| 2.6.2 PEG处理的转N21基因烟草和未用PEG处理的N21烟草 | 第41页 |
| 2.6.3 PEG处理的转N21基因烟草和PEG处理的亲本烟草 | 第41页 |
| 2.7 TMV胁迫下转N21基因烟草抗病防卫反应相关差异表达基因分析和验证 | 第41-44页 |
| 2.7.1 差异表达基因分析 | 第42页 |
| 2.7.2 差异表达基因荧光定量RT-PCR验证 | 第42-44页 |
| 结果与分析 | 第44-73页 |
| 1 Hpa1_(Xoo)-N21多肽在植物上的应用效果分析 | 第44-47页 |
| 1.1 N21多肽在烟草上的HR活性 | 第44页 |
| 1.2 N21多肽的促生作用 | 第44-45页 |
| 1.3 N21多肽诱导的抗病作用 | 第45-46页 |
| 1.3.1 诱导对灰霉病的抗性测定 | 第45-46页 |
| 1.3.2 诱导对褐腐病的抗性测定 | 第46页 |
| 1.4 N21多肽的抗旱作用 | 第46-47页 |
| 2 转N21基因烟草植株目的基因验证 | 第47-48页 |
| 2.1 转N21基因烟草gDNA的PCR检测 | 第47-48页 |
| 2.2 转基因烟草N21转录表达验证 | 第48页 |
| 3 转基因烟草基因芯片分析 | 第48-56页 |
| 3.1 不同处理样品烟草芯片杂交分析 | 第48-49页 |
| 3.2 胁迫下转N21基因烟草差异表达基因分析 | 第49-56页 |
| 3.2.1 接种TMV的亲本烟草和未接种TMV的亲本烟草 | 第50-52页 |
| 3.2.2 接种TMV的转N21基因烟草和未接种TMV的转N21基因烟草 | 第52-53页 |
| 3.2.3 接种TMV的转N21基因烟草和接种TMV的亲本烟草 | 第53-55页 |
| 3.2.4 转N21基因烟草和出发亲本烟草 | 第55-56页 |
| 4 胁迫下转N21基因烟草抗病防卫反应相关差异表达基因分析 | 第56-69页 |
| 4.1 不同通路中差异表达基因 | 第56-67页 |
| 4.1.1 接种TMV的转基因烟草和未接种TMV的转基因烟草 | 第56-61页 |
| 4.1.2 接种TMV的亲本烟草和未接种TMV的亲本烟草 | 第61-65页 |
| 4.1.3 接种TMV的转基因烟草和接种TMV的亲本烟草 | 第65-67页 |
| 4.2 极显著差异表达基因 | 第67-69页 |
| 5 TMV接种处理下抗病相关差异表达基因Real-Time PCR验证 | 第69-73页 |
| 讨论 | 第73-76页 |
| 1 N21多肽在植物上的效能及应用展望 | 第73页 |
| 2 胁迫下与未胁迫下转基因植物的抗病机制 | 第73-74页 |
| 3 hpa1_(Xoo)-N21产生有益表型的机制探讨 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 附录一 | 第88-89页 |
| 附录二 | 第89-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 本论文受资助基金项目 | 第103-104页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第104-105页 |
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