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棕色棉色素相关基因RNA干扰载体构建及表达分析
 
     论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-15页
第一章 引言第15-27页
   ·植物类黄酮物质及其合成途径研究进展第15-19页
     ·植物色素物质及类黄酮类物质分类第15页
     ·类黄酮合成途径第15-17页
     ·类黄酮合成途径结构基因及转录因子第17-19页
   ·天然彩色棉研究进展及应用前景第19-21页
     ·天然彩色棉色素物质生化研究第19-20页
     ·天然彩色棉色素合成相关基因研究第20-21页
     ·天然彩色棉存在问题及应用前景第21页
   ·RNA 干涉的原理及应用第21-23页
     ·RNA 干涉技术的作用机制第21-22页
       ·转录水平基因沉默(TGS)第22页
       ·转录后水平基因沉默(PTGS)第22页
       ·翻译水平基因沉默第22页
     ·RNA 干涉技术的特点第22-23页
     ·RNA 干涉技术在植物中的应用现状第23页
   ·Aritificial microRNA 技术的原理及应用第23-26页
     ·AmiRNA 技术的作用机制第24页
     ·AmiRNA 技术的特点第24-25页
     ·AmiRNA 技术在植物中的应用现状第25-26页
       ·AmiRNA 技术在模式植物中的应用第25页
       ·AmiRNA 技术在其他植物中的研究第25-26页
   ·本研究的目的意义第26-27页
第二章 棕色棉不同发育时期色素物质分析第27-35页
   ·实验材料及设备第27-28页
     ·实验材料第27页
     ·主要试剂第27页
     ·试验主要仪器第27-28页
   ·试验方法第28页
     ·棕色棉显色反应第28页
       ·NaOH 反应第28页
       ·盐酸-镁粉反应第28页
     ·棕色棉纤维色素甲醇提取液光谱分析第28页
   ·结果与分析第28-32页
     ·棕色棉纤维色素提取液显色反应分析第28-30页
     ·棕色棉纤维色素甲醇提取液光谱分析第30-32页
   ·小结与讨论第32-35页
     ·小结第32-33页
     ·讨论第33-35页
第三章 棕色棉CHS、F3'5'H 基因的克隆及其RNAi 载体构建第35-54页
   ·试验材料第35-36页
     ·试验材料第35页
     ·菌株、载体及质粒第35页
     ·试验主要试剂第35页
     ·试验主要仪器第35-36页
   ·试验方法第36-44页
     ·试验材料的准备第36页
     ·改良CTAB 法提取总 RNA第36-38页
       ·RNA 提取步骤第36-37页
       ·RNA 提取试剂的配制第37-38页
     ·RT-PCR 得到第一链cDNA第38页
     ·CHS、F3'5'H 基因的克隆第38-41页
       ·CHS 基因全长序列的获得第38-39页
       ·F3'5'H 的基因全长的获得第39页
       ·DNA 片段的凝胶回收第39页
       ·PCR 产物的TA 克隆第39-40页
       ·热激法转化大肠杆菌及阳性克隆的筛选第40页
       ·转化子的筛选及鉴定第40-41页
       ·PCR 产物的测序及序列比对第41页
     ·CHS、F3'5'H 基因的RNAi 载体构建第41-43页
       ·RNA 干扰载体构建流程第41-42页
       ·正反义片段的扩增第42页
       ·正反义片段的凝胶回收第42页
       ·双酶切体系及方法第42-43页
       ·连接反应体系及方法第43页
       ·连接产物转化大肠杆菌第43页
       ·RNA 干扰载体的验证第43页
     ·RNA 干扰质粒的遗传转化第43-44页
       ·质粒DNA 的大量提取第43-44页
       ·花粉管通道法导入目的基因第44页
   ·结果与分析第44-52页
     ·目的基因序列的克隆及PCR 检测第44-45页
     ·目的基因序列的同源性分析第45-50页
     ·RNA 干扰载体的验证分析第50-52页
   ·小结与讨论第52-54页
     ·小结第52页
     ·讨论第52-54页
第四章 棕色棉CHS、F3'5'H 基因的AmiRNA 载体构建第54-62页
   ·试验材料第54页
   ·试验方法第54-58页
     ·CHS 基因及F3'5'H 基因的AmiRNA 载体的构建第54-58页
       ·靶向CHS 及F3'5'H 的AmiRNA 序列的设计第54-57页
       ·CHS 及F3'5'H 的AmiRNA DNA 序列合成及亚克隆第57页
       ·AmiCHS 及AmiF3'5'H 测序质粒的提取第57页
       ·CHS 及F3'5'H AmiRNA 表达载体的构建第57页
       ·CHS 及F3'5'H AmiRNA 表达载体的检测第57-58页
     ·CHS 及F3'5'H AmiRNA 表达载体的遗传转化第58页
   ·结果与分析第58-61页
     ·AmiRNACHS 及AmiRNAF3'5'H 二级结构预测第58页
     ·CHS 及F3'5'H 的AmiRNA 相应的DNA 序列合成及亚克隆第58页
     ·pBI-AmiCHS 及pBI-AmiF3'5'H 载体的结果验证第58-61页
   ·小结与讨论第61-62页
     ·小结第61页
     ·讨论第61-62页
第五章 棕色棉纤维类黄酮合成途径转录因子基因的表达分析第62-70页
   ·试验材料第62页
   ·试验方法第62-65页
     ·棉花纤维RNA 提取与检测第62-63页
     ·第一链cDNA 合成第63页
     ·基因的选择与引物合成第63页
     ·实时荧光定量PCR 程序第63-64页
     ·实时荧光定量PCR 数据的处理第64-65页
   ·结果与分析第65-68页
     ·RNA 提取质量检测第65-66页
     ·内参基因的筛选第66页
     ·棕色棉类黄酮合成途径转录因子基因的表达分析第66-68页
   ·小结与讨论第68-70页
     ·小结第68页
     ·讨论第68-70页
第六章 全文结论第70-71页
参考文献第71-76页
致谢第76-77页
作者简介第77页

 
 
论文编号BS304824,这篇论文共77
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