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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--HCV新型DNA疫苗及靶向HCV-RNA G4的抗病毒策略研究
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HCV新型DNA疫苗及靶向HCV-RNA G4的抗病毒策略研究
 
     论文目录
 
中文摘要第7-9页
ABSTRACT第9-11页
第一章 引言第14-29页
    1.1 HCV病毒粒子第14-15页
    1.2 高度变异的HCV基因组RNA第15-16页
    1.3 HCV感染过程第16-18页
    1.4 HCV的防治第18-20页
    1.5 HCV包膜蛋白研究进展第20-22页
    1.6 HCV CORE蛋白研究进展第22-23页
    1.7 G4链体结构以及功能第23-27页
    1.8 研究目的第27-29页
第二章 HCV分泌型E2蛋白N-糖基化修饰及其在研制免疫原性增强的HCV疫苗和单抗中的研究第29-73页
    2.1 实验材料第29-32页
    2.2 主要仪器第32页
    2.3 实验方法第32-49页
        2.3.1 分泌型E2的不同N糖基化缺失突变体及sE2-CD19 scFV的构建第32-35页
        2.3.2 DNA疫苗的表达鉴定及E2蛋白的定位分析第35-36页
        2.3.3 DNA疫苗在小鼠体内的表达检测第36页
        2.3.4 原核表达sE2蛋白以及sE2-CD19 scFV蛋白制备第36-38页
        2.3.5 sE2-CD19 scFV靶向性的测定第38页
        2.3.6 去内毒素的质粒DNA疫苗的大量制备第38-39页
        2.3.7 疫苗免疫小鼠步骤第39页
        2.3.8 HCV病毒扩增、纯化以及感染复数的测定第39-41页
        2.3.9 免疫后特异性抗体效价的检测第41页
        2.3.10 ELISPOT检测T细胞内IL-4和IFN-γ的表达第41-42页
        2.3.11 FCM检测免疫后小鼠脾脏中E2抗原特异性CD4~+T细胞以及CD8~+T细胞的活化第42-43页
        2.3.12 乳酸脱氢酶释放实验检测小鼠脾脏细胞CTL功能第43-44页
        2.3.13 小鼠体内荷瘤实验检测体内CTL活性第44页
        2.3.14 流式细胞仪检测淋巴结DC中IL-10和IL-12的表达第44页
        2.3.15 免疫后小鼠抗血清对HCVcc的中和实验第44-46页
        2.3.16 sE2N2单抗的制备第46-47页
        2.3.17 单抗表位检测第47-48页
        2.3.18 单抗亚型测定、中和实验、及其与病毒结合的亲和性第48页
        2.3.19 HCV受体转基因小鼠攻毒验证单抗的中和保护作用第48-49页
        2.3.20 统计分析第49页
    2.4 实验结果第49-69页
        2.4.1 PCR定点突变获得sE2的糖基化突变体sE2Nx第49-50页
        2.4.2 DNA疫苗能够在体内外有效表达第50-51页
        2.4.3 sE2-His蛋白的原核表达以及纯化第51-52页
        2.4.4 糖基化缺失突变体组能刺激脾细胞中更强的IFN-γ及IL-4的释放第52-54页
        2.4.5 sE2N1以及sE2N2的体内外特异性CTL活性最高第54-56页
        2.4.6 E2的N2糖基化缺失后对抗原递呈的影响第56-58页
        2.4.7 免疫小鼠血清中抗体效价测定第58-59页
        2.4.8 sE2N2组免疫小鼠的抗血清有效中和HCVcc第59-60页
        2.4.9 利用sE2N2免疫后小鼠筛选针对HCV的中和性单抗第60-63页
        2.4.10 靶向B细胞的HCV疫苗的研究第63-69页
    2.5 讨论第69-73页
第三章 HCV core G4链体结构的鉴定及靶向G4结构的抗病毒策略研究第73-98页
    3.1 实验材料第73-74页
    3.2 主要仪器第74页
    3.3 实验方法第74-83页
        3.3.1 生物信息学分析第74-75页
        3.3.2 核磁共振分析第75页
        3.3.3 克隆构建第75-78页
        3.3.4 HCVcc病毒包装第78-79页
        3.3.5 HCV扩增、浓缩、纯化以及滴度测定第79页
        3.3.6 PDP和TMPyP4药物对富G序列下游蛋白及CORE蛋白的抑制第79页
        3.3.7 PDP和TMPyP4药物的抗病毒活性第79-81页
        3.3.8 Pull-down检测Biotin-PDP对HCV上富G序列的富集第81页
        3.3.9 免疫荧光及共聚焦显微镜观察Biotin-PDP与HCV上富G序列的共定位情况第81-82页
        3.3.10 统计分析第82-83页
    3.4 实验结果第83-95页
        3.4.1 序列分析HCV基因组中保守的富G序列第83-84页
        3.4.2 ~1H核磁共振检测1a和1b富G序列第84-85页
        3.4.3 HCV富G序列在胞内可形成G4结构,该结构可被G4配体结合第85-87页
        3.4.4 HCV基因组RNA可形成G4结构,该结构可被G4配体结合第87-88页
        3.4.5 G4稳定剂对HCV G4 RNA被稳定后蛋白表达影响第88-89页
        3.4.6 G4稳定剂对HCV CORE蛋白及其对应的G4突变体的表达影响第89-90页
        3.4.7 G4稳定剂的抗病毒活性第90-93页
        3.4.8 HCV基因组中富G序列突变后抑制了G4配体的相互作用第93-95页
    3.5 讨论第95-98页
参考文献第98-108页
综述第108-123页
    综述部分参考文献第118-123页
附录第123-125页
攻读博士学位期间已发表的科研成果第125-126页
后记第126-127页

 
 
论文编号BS4011324,这篇论文共127
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