| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1模式菌株——扭脱甲基杆菌AM1 | 第13-15页 |
| 1.1.1 扭脱甲基杆菌AM1的简介 | 第13页 |
| 1.1.2 扭脱甲基杆菌AM1的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2 甲羟戊酸的概述 | 第15-16页 |
| 1.3 甲醇基微生物细胞工厂 | 第16-18页 |
| 1.3.1 甲醇基细胞工厂的概述 | 第16-17页 |
| 1.3.2 甲醇基细胞工厂存在的关键问题 | 第17-18页 |
| 1.4 高密度发酵技术 | 第18-20页 |
| 1.4.1 高密度发酵技术的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4.2 高密度发酵技术的影响因素 | 第19-20页 |
| 1.5 氧载体的简介 | 第20-22页 |
| 1.6 本课题研究内容和框架 | 第22-23页 |
| 1.6.1 主要研究内容 | 第22页 |
| 1.6.2 研究框架 | 第22-23页 |
| 第2章 氧载体对扭脱甲基杆菌AM1发酵的影响 | 第23-53页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第23-25页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.3 菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 2.2.4 基因操作酶和试剂盒 | 第27-28页 |
| 2.2.5 培养基 | 第28-29页 |
| 2.3 实验操作及分析方法 | 第29-41页 |
| 2.3.1 Gibson组装 | 第29-30页 |
| 2.3.2 电转感受态制备及电击转化 | 第30-31页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE | 第31-32页 |
| 2.3.4 基因组提取 | 第32页 |
| 2.3.5 基因敲除/基因整合 | 第32-34页 |
| 2.3.6 质粒转化操作步骤 | 第34页 |
| 2.3.7 提取质粒 | 第34-35页 |
| 2.3.8 PCR反应操作 | 第35-36页 |
| 2.3.9 DNA琼脂凝胶电泳 | 第36页 |
| 2.3.10 回收纯化凝胶中DNA | 第36-37页 |
| 2.3.11 酶切操作 | 第37页 |
| 2.3.12 质粒连接操作 | 第37-38页 |
| 2.3.13 菌体浓度检测 | 第38页 |
| 2.3.14 甲醇检测 | 第38-39页 |
| 2.3.15 甲羟戊酸检测 | 第39-41页 |
| 2.4 氧载体实验 | 第41页 |
| 2.5 基因工程菌的构建 | 第41-46页 |
| 2.5.1 本节实验用到的引物 | 第41页 |
| 2.5.2 在扭脱甲基杆菌AM1基因组上构建含有vgb基因的菌株 | 第41-44页 |
| 2.5.3 vgb基因的菌株的构建 | 第44-46页 |
| 2.6 结果与讨论 | 第46-50页 |
| 2.6.1 探究氧载体能否作为碳源被甲基菌利用实验 | 第46页 |
| 2.6.2 不同氧载体添加对扭脱甲基杆菌AM1生长的影响 | 第46-49页 |
| 2.6.3 构建的带有不同启动子的扭脱甲基杆菌AM1生长情况 | 第49-50页 |
| 2.7 VGB基因表达的验证 | 第50-51页 |
| 2.8 不同扭脱甲基杆菌AM1产甲羟戊酸产量情况 | 第51页 |
| 2.9 菌株重新构建 | 第51页 |
| 2.10 本章小结 | 第51-53页 |
| 第3章 高耐受甲醇扭脱甲基杆菌的构建及稳定性研究 | 第53-59页 |
| 3.1 引言 | 第53页 |
| 3.2 实验材料 | 第53-54页 |
| 3.2.1 实验药品 | 第53页 |
| 3.2.2 实验菌株 | 第53-54页 |
| 3.2.3 培养基及培养方法 | 第54页 |
| 3.2.4 ARTP操作及适应性进化培养 | 第54页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第54-58页 |
| 3.3.1 诱变前后菌株的生长情况 | 第54-57页 |
| 3.3.2 诱变后菌株的遗传稳定性研究 | 第57-58页 |
| 3.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第四章 扭脱甲基杆菌的高密度发酵 | 第59-67页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.2.1 实验药品 | 第59页 |
| 4.2.2 实验菌株 | 第59-60页 |
| 4.2.3 本章用到的引物 | 第60页 |
| 4.3 发酵罐操作 | 第60-61页 |
| 4.4 高产甲羟戊酸菌株的构建 | 第61-62页 |
| 4.4.1 构建pCM110-P_(maxF)-vgb-mvt-qscr质粒 | 第61-62页 |
| 4.4.2 将构建好的质粒整合到扭脱甲基杆菌AM1中 | 第62页 |
| 4.5 菌株的发酵评价 | 第62-66页 |
| 4.5.1 新构建菌株的生长曲线测定 | 第62-64页 |
| 4.5.2 扭脱甲基杆菌AM1批次发酵实验 | 第64页 |
| 4.5.3 批次发酵结果 | 第64页 |
| 4.5.4 甲醇流加补料发酵 | 第64-66页 |
| 4.6 本章小结 | 第66-67页 |
| 第5章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 5.1 结论 | 第67-68页 |
| 5.2 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 个人简介及攻读学位期间发表的学术论文 | 第74-75页 |
| 个人简介 | 第74页 |
| 发表的学术论文 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
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