| 摘要 | 第1-6页 |
| SUMMARY | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1 牦牛的分类、分布地域及其适应高原环境的生物学特征 | 第13-18页 |
| ·牦牛的分类学地位 | 第13页 |
| ·牦牛的分布地域 | 第13-14页 |
| ·牦牛适应高原环境的生物学特征 | 第14-18页 |
| ·对高寒环境的适应性特征 | 第14-15页 |
| ·对低氧环境的适应性特征 | 第15-17页 |
| ·对高山草原环境的适应性特征 | 第17-18页 |
| 2 内皮 PAS1 蛋白(EPAS1)基因的研究进展 | 第18-22页 |
| ·EPAS1 的概述 | 第18-20页 |
| ·EPAS1 与低氧适应性 | 第20-22页 |
| ·EPAS1 与红细胞和血红蛋白的生成 | 第20-21页 |
| ·EPAS1 与体内铁的内稳态 | 第21-22页 |
| ·EPAS1 与肺动脉高压 | 第22页 |
| ·EPAS1 与能量代谢 | 第22页 |
| ·EPAS1 与血管的渗透性 | 第22页 |
| 3 血管内皮生长因子-A(VEGF-A)基因的研究进展 | 第22-25页 |
| ·VEGF-A 概述 | 第23-24页 |
| ·VEGF-A 与低氧适应性 | 第24-25页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第26-33页 |
| 1 试验材料 | 第26页 |
| ·血液样品的采集 | 第26页 |
| ·组织样品的采集 | 第26页 |
| 2 主要仪器设备 | 第26页 |
| 3 主要试剂及来源 | 第26-27页 |
| ·分子生物学试剂和试剂盒 | 第26-27页 |
| ·普通试剂 | 第27页 |
| ·菌种和载体 | 第27页 |
| 4 主要溶液及试剂的配制 | 第27页 |
| 5 实验方法 | 第27-31页 |
| ·候选基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·总 RNA 的提取及检测 | 第27页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第27页 |
| ·扩增引物的设计 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR 扩增反应体系及扩增条件 | 第28页 |
| ·PCR 产物的回收、克隆，鉴定和测序 | 第28页 |
| ·候选基因的 SNPs 筛查 | 第28-30页 |
| ·基因组 DNA 的提取及检测 | 第28页 |
| ·EPAS1 基因 SNP 检测引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| ·VEGF-A 基因 SNP 检测引物的设计与合成 | 第29-30页 |
| ·PCR 扩增 | 第30页 |
| ·PCR 扩增产物的 SSCP 分析 | 第30页 |
| ·PCR 扩增产物的 RFLP 分析 | 第30页 |
| ·PCR 产物的回收、克隆，鉴定和测序 | 第30页 |
| ·候选基因的表达分析 | 第30-31页 |
| ·引物设计与合成 | 第30-31页 |
| ·Real-time PCR | 第31页 |
| 6 数据统计分析方法 | 第31-33页 |
| ·生物信息学分析 | 第31-32页 |
| ·遗传多态性分析 | 第32页 |
| ·中性检验 | 第32页 |
| ·基因表达量分析 | 第32-33页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第33-61页 |
| 1 牦牛 EPAS1 基因 cDNA 的克隆及分子特征 | 第33-38页 |
| ·牦牛血样 DNA 提取质量的检测 | 第33页 |
| ·牦牛 EPAS1 基因的 PCR 扩增 | 第33页 |
| ·牦牛 EPAS1 蛋白的理化性质 | 第33页 |
| ·牦牛 EPAS1 蛋白疏水性/亲水性分析 | 第33-35页 |
| ·牦牛 EPAS1 蛋白信号肽和跨膜区分析 | 第35页 |
| ·牦牛 EPAS1 蛋白的亚细胞定位 | 第35-36页 |
| ·牦牛 EPAS1 蛋白结构域和蛋白质功能位点预测 | 第36页 |
| ·牦牛 EPAS1 蛋白二级结构和三级结构预测 | 第36-37页 |
| ·牦牛 EPAS1 蛋白的系统发育分析 | 第37页 |
| ·牦牛 EPAS1 蛋白功能预测与分析 | 第37-38页 |
| 2 牦牛 VEGF-A 基因 cDNA 的克隆及分子特征 | 第38-43页 |
| ·总 RNA 的提取与检测 | 第38页 |
| ·牦牛 VEGF-A 基因的 PCR 扩增 | 第38-39页 |
| ·牦牛 VEGF-A 基因的克隆与酶切鉴定 | 第39页 |
| ·牦牛 VEGF-A 基因的序列测定及分析 | 第39-40页 |
| ·牦牛 VEGF-A 蛋白的理化性质 | 第40页 |
| ·牦牛 VEGF-A 蛋白的疏水性/亲水性预测和分析 | 第40-41页 |
| ·牦牛 VEGF-A 蛋白信号肽和跨膜区分析 | 第41页 |
| ·牦牛 VEGF-A 蛋白结构域和蛋白质功能位点预测 | 第41-42页 |
| ·牦牛 VEGF-A 蛋白二级结构和三级结构预测 | 第42页 |
| ·牦牛 VEGF-A 蛋白的系统发育分析 | 第42-43页 |
| 3 牦牛 EPAS1 基因遗传变异检测 | 第43-48页 |
| ·PCR 产物琼脂糖凝胶电泳检测 | 第43页 |
| ·牦牛 EPAS1 基因 SNPs 筛选 | 第43-44页 |
| ·牦牛 EPAS1 基因 SNPs 基因型检测 | 第44页 |
| ·SNPs 基因型频率在 3 个牦牛群体中的分布 | 第44-45页 |
| ·3个牦牛群体中 SNPs 位点的 Hardy-Weinberg 平衡检验结果 | 第45页 |
| ·各群体间基因型频率差异比较 | 第45-46页 |
| ·连锁不平衡和单倍型分析 | 第46-47页 |
| ·SNP 的中性检验 | 第47-48页 |
| ·候选基因功能的验证 | 第48页 |
| 4 牦牛 VEGF-A 基因遗传变异检测 | 第48-54页 |
| ·PCR 产物琼脂糖凝胶电泳检测 | 第48页 |
| ·牦牛 VEGF-A 基因 SNPs 筛选 | 第48页 |
| ·牦牛 VEGF-A 基因 SNPs 基因型检测 | 第48-49页 |
| ·牦牛 VEGF-A 基因 g.8430T＞C 的 Hin1Ⅱ酶切分析 | 第48-49页 |
| ·牦牛 VEGF-A 基因 g.14853G＞A 的 StyⅠ酶切分析 | 第49页 |
| ·SNPs 基因型频率与等位基因频率在 3 个牦牛群体中的分布 | 第49-50页 |
| ·3个牦牛群体中 SNPs 位点的 Hardy-Weinberg 检验结果 | 第50页 |
| ·各群体间基因型频率和等位基因频率差异比较 | 第50-51页 |
| ·连锁不平衡和单倍型分析 | 第51-53页 |
| ·SNP 的中性检验 | 第53-54页 |
| 5 牦牛 EPAS1 基因表达规律分析 | 第54-56页 |
| ·扩增产物特异性检测 | 第54-55页 |
| ·EPAS1 基因的组织表达谱分析 | 第55-56页 |
| ·EPAS1 基因在牦牛和高原地区黄牛不同组织中表达量差异分析 | 第56页 |
| 6 牦牛 VEGF-A 基因表达规律分析 | 第56-59页 |
| ·扩增产物特异性检测 | 第56-57页 |
| ·VEGF-A 基因的组织表达谱分析 | 第57-58页 |
| ·VEGF-A 基因在牦牛和高原地区黄牛不同组织中表达差异分析 | 第58-59页 |
| 7 EPAS1 基因和 VEGF-A 基因在牦牛和高原地区黄牛不同组织中表达量的相关性分析 | 第59-61页 |
| 第四部分 讨论 | 第61-65页 |
| 1 采样和试验方法 | 第61页 |
| 2 候选基因的 SNPs 与低氧适应性 | 第61-63页 |
| ·EPAS1 基因的 SNPs 与低氧适应性的关系 | 第61-62页 |
| ·VEGF-A 基因的 SNPs 与低氧适应性的关系 | 第62-63页 |
| 3 候选基因的表达量与低氧适应性 | 第63-65页 |
| ·EPAS1 基因的 mRNA 表达量与低氧适应性的关系 | 第63页 |
| ·VEGF-A 基因的 mRNA 表达量与低氧适应性的关系 | 第63-64页 |
| ·EPAS1 和 VEGF-A 基因表达量的相关性 | 第64-65页 |
| 第五部分 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简介 | 第80-81页 |
| 导师简介 | 第81-82页 |
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