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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)突变体库的构建及致病相关基因克隆和鉴定
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灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)突变体库的构建及致病相关基因克隆和鉴定
 
     论文目录
 
摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
第一章 绪论第11-19页
    1.1 灰霉病的发生状况第11-12页
    1.2 灰葡萄孢菌的致病分子机制研究进展第12-16页
        1.2.1 酶类第13页
        1.2.2 毒素第13-15页
        1.2.3 G蛋白信号转导途径的调控因子第15-16页
    1.3 农杆菌介导的灰葡萄孢菌转化及T-DNA标签在基因克隆上的研究进展第16-19页
第二章 灰葡萄孢菌突变体库的建立及筛选第19-32页
    2.1 材料第19-22页
        2.1.1 供试菌株第19页
        2.1.2 载体第19页
        2.1.3 主要供试试剂及仪器第19-21页
        2.1.4 培养基第21-22页
    2.2 方法第22-25页
        2.2.1 农杆菌AGL-1感受态细胞制备第22-23页
        2.2.2 农杆菌介导的灰霉转化第23-24页
        2.2.3 转化子生物学性状分析第24-25页
    2.3 结果与分析第25-31页
        2.3.1 灰葡萄孢菌转化子获得以及抗性稳定性检测第25页
        2.3.2 突变体的生物性状第25-30页
        2.3.3 致病力测定第30-31页
    2.4 小结与讨论第31-32页
第三章 T-DNA插入的分子鉴定及突变体插入位点侧翼序列的克隆分析第32-59页
    3.1 材料第32-33页
        3.1.1 供试菌株第32页
        3.1.2 供试试剂及仪器第32-33页
    3.2 方法第33-40页
        3.2.1 转化子基因组DNA提取第33-34页
        3.2.2 琼脂糖凝胶电泳检测第34页
        3.2.3 转化子的PCR分子验证第34-35页
        3.2.4 转化子中T-DNA插入位点侧翼序列的克隆和测序第35-40页
        3.2.5 T-DNA插入灰葡萄孢基因组交界区的PCR验证第40页
    3.3 结果与分析第40-58页
        3.3.1 转化子基因组DNA的提取第40-41页
        3.3.2 转化子潮霉素基因PCR检测第41-42页
        3.3.3 灰葡萄孢菌基因组T-DNA旁侧序列的克隆分析第42-58页
    3.4 小结与讨论第58-59页
第四章 T-DNA插入模式的Southern blotting分析、目标基因RT-PCR分析及全长cDNA克隆第59-74页
    4.1 材料第59-60页
        4.1.1 供试菌株第59页
        4.1.2 供试试剂及仪器第59-60页
    4.2 方法第60-68页
        4.2.1 Southen blot分析第60-63页
        4.2.2 RT-PCR检测T-DNA插入的基因是否表达第63-67页
        4.2.3 RACE技术克隆全长cDN A第67-68页
    4.3 结果与分析第68-72页
        4.3.1 Southern blotting第68-71页
        4.3.2 转化子RT-PCR分子鉴定第71-72页
        4.3.3 RACE技术克隆全长cDNA结果分析第72页
    4.4 小结与讨论第72-74页
第五章 目标基因全长序列克隆、表达载体构建以及突变体遗传互补第74-83页
    5.1 材料第74页
        5.1.1 菌株第74页
        5.1.2 试剂与仪器第74页
    5.2 方法第74-78页
        5.2.1 入门载体pENTR/D-TOPO-Bc79的构建第74-77页
        5.2.2 构建pCAMBIA-Bar-Bc 79载体第77-78页
        5.2.3 互补转化子的获得及表型分析第78页
    5.3 结果与分析第78-82页
        5.3.1 H-79转化子基因BC1G_07803.1的克隆第78-79页
        5.3.2 构建pENTR/D-TOPO-Bc79质粒第79-80页
        5.3.3 构建pCAMBIA-Bar-Bc79及pCAMBIA-Bar-Bc7质粒第80页
        5.3.4 互补转化子的获得及表型分析第80-82页
    5.4 小结与讨论第82-83页
第六章 结论与展望第83-84页
参考文献:第84-91页
致谢第91-92页
在读期间发表的学术论文第92页

 
 
论文编号BS3212225,这篇论文共92
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