| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-25页 |
| 1.1 细菌肽聚糖 | 第15-19页 |
| 1.1.1 细菌细胞壁 | 第15页 |
| 1.1.2 肽聚糖的化学组成和结构特点 | 第15-16页 |
| 1.1.3 肽聚糖的生物合成与重塑 | 第16-18页 |
| 1.1.4 肽聚糖循环和β-内酰胺酶表达之间的关系 | 第18-19页 |
| 1.2 青霉素结合蛋白 | 第19-20页 |
| 1.2.1 青霉素结合蛋白命名及分类 | 第19页 |
| 1.2.2 青霉素结合蛋白的功能 | 第19-20页 |
| 1.3 肽聚糖合成酶复合体PBP1a/LpoA与 PBP1b/LpoB | 第20-23页 |
| 1.3.1 肽聚糖合成酶复合体的组成 | 第20-22页 |
| 1.3.2 肽聚糖合成酶复合体的生理功能差异 | 第22-23页 |
| 1.4 选题意义、研究内容及技术路线 | 第23-25页 |
| 1.4.1 选题意义 | 第23页 |
| 1.4.2 研究内容及技术路线 | 第23-25页 |
| 第二章 两个PBP1-Lpo复合体缺失突变株的生理表型差异 | 第25-35页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 供试菌株、质粒和培养条件 | 第25-26页 |
| 2.2.2 实验试剂及配方 | 第26-27页 |
| 2.2.3 框内缺失突变株的构建 | 第27页 |
| 2.2.4 细胞形态观察 | 第27页 |
| 2.2.5 低渗环境(NaCl-less)、SDS和 VAN敏感性测定 | 第27页 |
| 2.2.6 NaCl敏感性测定 | 第27-28页 |
| 2.2.7 NPN摄取能力测定 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-33页 |
| 2.3.1 PBP1a/LpoA缺失菌株的细胞形态受损 | 第28-29页 |
| 2.3.2 PBP1a/LpoA缺失菌株对渗透压敏感 | 第29-30页 |
| 2.3.3 PBP1a/LpoA缺失菌株对SDS敏感 | 第30-31页 |
| 2.3.4 PBP1a/LpoA缺失菌株的细胞外膜通透性增强 | 第31-33页 |
| 2.4 本章小结与讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 PBP1b表达量上调功能补偿PBP1a | 第35-44页 |
| 3.1 引言 | 第35-36页 |
| 3.2 材料与方法 | 第36-37页 |
| 3.2.1 供试菌株、质粒和培养条件 | 第36页 |
| 3.2.2 试剂 | 第36-37页 |
| 3.2.3 基因回补菌株的构建 | 第37页 |
| 3.2.4 表型检测 | 第37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.3.1 低剂量诱导PBP1b使 PBP1a/LpoA缺失菌株表型回复 | 第37-38页 |
| 3.3.2 PBP1b过量表达对菌株有毒害作用 | 第38-40页 |
| 3.3.3 PBP1b发挥功能离不开其任一结构域 | 第40页 |
| 3.3.4 LpoB表达量的增加不能使PBP1a/LpoA缺失菌株表型回复 | 第40-41页 |
| 3.4 本章小结与讨论 | 第41-44页 |
| 第四章 利用转座子插入技术筛选PBP1a/LpoA缺失抑制子 | 第44-57页 |
| 4.1 引言 | 第44-45页 |
| 4.2 材料与方法 | 第45-49页 |
| 4.2.1 供试菌株、质粒和培养条件 | 第45-46页 |
| 4.2.2 试剂 | 第46页 |
| 4.2.3 构建转座子随机突变体库 | 第46页 |
| 4.2.4 抑制子表型鉴定 | 第46-47页 |
| 4.2.5 AP-PCR | 第47页 |
| 4.2.6 转座子插入位点的确定 | 第47页 |
| 4.2.7 基因缺失突变株以及回补菌株构建 | 第47-48页 |
| 4.2.8 检测启动子活性 | 第48页 |
| 4.2.9 荧光定量PCR | 第48-49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-55页 |
| 4.3.1 构建转座子突变体库 | 第49页 |
| 4.3.2 AP-PCR扩增转座子插入位点侧翼片段 | 第49-50页 |
| 4.3.3 转座子插入位点的鉴定 | 第50-53页 |
| 4.3.4 hrpB失活对PBP1a/LpoA缺失菌株表型缺陷无影响 | 第53-54页 |
| 4.3.5 hrpB抑制子中PBP1b表达量上调 | 第54-55页 |
| 4.4 本章小结与讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 严谨饥饿蛋白SspA调控PBP1b的功能补偿 | 第57-67页 |
| 5.1 引言 | 第57-58页 |
| 5.2 材料与方法 | 第58-61页 |
| 5.2.1 供试菌株、质粒和培养条件 | 第58页 |
| 5.2.2 基因缺失突变株的构建 | 第58页 |
| 5.2.3 基因回补菌株的构建 | 第58页 |
| 5.2.4 荧光定量PCR | 第58页 |
| 5.2.5 表型检测 | 第58页 |
| 5.2.6 凝胶迁移实验 | 第58-61页 |
| 5.3 结果与分析 | 第61-65页 |
| 5.3.1 sspA失活抑制PBP1a/LpoA缺失菌株表型缺陷 | 第61页 |
| 5.3.2 sspA失活使PBP1b表达量增强 | 第61-62页 |
| 5.3.3 SspA非直接调控mrcB | 第62-63页 |
| 5.3.4 SspA通过调控H-NS参与PBP1b的功能补偿 | 第63-64页 |
| 5.3.5 σ因子RpoS对 PBP1a/LpoA缺失菌株表型无影响 | 第64-65页 |
| 5.4 本章小结与讨论 | 第65-67页 |
| 第六章 总结与展望 | 第67-69页 |
| 6.1 总结 | 第67-68页 |
| 6.2 创新之处 | 第68页 |
| 6.3 不足与展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 附录 | 第76-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 作者简介 | 第82-83页 |
| 1 作者简历 | 第82页 |
| 2 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第82-83页 |
| 学位论文数据集 | 第83页 |
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